Deshidratación de tejidos

Deshidratación

DESHIDRATACIÓN DE TEJIDOS
La mayoría de los medios de infiltración (la matriz de soporte sólido para hacer cortes de muestras de tejidos) son hidrofóbicos, por tanto el agua debe ser eliminada de los tejidos antes de porcesados posterioes. Hay dos métodos generales para deshidratar tejidos. El más común es el reemplazamiento gradual de agua con un solvente orgánico portransferencia del tejido a través de soluciones de concentraciones crecientes (etanol, acetona)-referido como una serie de deshidratación graduada. Un método menos común en microscopía de campo claro es una deshidratación rápida utilizando un reactivo orgánico (metil celosolve, dimetoxipropano, trietil fosfato). Durante la deshidratación rápida, el agua del tejido es reemplazada rápidamente, sin el dañopor tensión superficial que puede ir asociado con los alcoholes o la acetona. El metil celosolve y dimetoxipropano tienen regiones hidrofílicas e hidrofóbicas. Esto permite que el solvente interactúe con los lípidos de las membranas biológicas, sin causar alteración. La deshidratación resultante es vía un mecanismo de flujo en masa en vez de una reacción química. Estos solventes pueden hidrolizarel agua para formar etanol y acetna, sin embargo, la energía y condiciones requeridas para esta reacción no son normales en las condiciones de fijación y no son consistentes con la preservación de tejidos. El mérito relativo de cada método es subjetivo y depende de los tejidos implicados y sobre las preferencias personales. Históricamente, la deshidratación rápida se ha limitado a los métodos deinfiltración en plásticos, pero pueden ser ciertamente usados en las técnicas de parafina.

La mayoría de los solventes de deshidratación no son también solventes de parafina; por tanto incorporaremos varios pasos de intermediarios para mover el tejido del agente deshidratante hasta la parafina. Ejemplos de agentes intermedios son Histo-Clear, xileno, isopropanol, y tert-butil alcolhol (TBA).Estos deben ser incluídos en el programa de deshidratación después de las soluciones de deshidratación pero antes de la infiltración en parafina. Algunos solventes intermedios pueden endurecer tejidos (xileno) mientras que su químico homólogo debe esr más tóxico (cloroformo, benceno). El Histo-Clear o el TBA se refieren a ellos como relativamente inocuos y fácilmente obtenibles. El isopropanol espreferido cuando se usa la técnica de micro ondas. El huso de Histo-Clear extraerá un fino pegamento amarillo que atrapará y destruirá las muestras de tejidos. A 58ºC la extracción puede ocurrir dentro de una semana. Cuando infiltramos en plástico, no se requiere un solvente intermediario. Los tejidos pueden ser transferidos directamente de la solución de deshidratación final al primer paso delmonómero de plástico.

Es importante tener presente que los pasos de la solución de deshidratación e infiltración son solventes orgánicos. Por tanto, cuando etiquetes las muestras de tejidos usa pequeñas etiquetas de papel escritos con lápiz y no con boli. Pon la etiqueta en el vial con la muestra de tejido. Los solventes orgánicos disolverán el pegamento que está sobre la etiqueta del vial y la tintaque usaste mara marcar la etiqueta.

Después de la deshidratación, los tejidos deben ser procesados por cualquier número de técnicas. Desde la microscopía electrónica hasta la infiltración en plástico para inmunolocalización hasta la técnica standar de parafina, la deshidratación es el punto de apoyo para todas las técnicas de investigación en tejidos.
Deshidratación usando una serie desolventes en gradiente- etanol, acetona
El método más común para eliminar el agua de los tejidos usa etanol como agente deshidratante. Deshidrata el tejido pasando a través de series de etanol graduado empezando con un 30% y acabando con etanol 100% (200 grados, anhidro). Paratodas las diluciones excepto para la dilución final de etanol, debe ser usado etanol de 95% comercial. Desde cada paso en la...