deshidrogenasa lactica

UNIVERSIDAD DE SONORA
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICO-BIOLÓGICAS
Lic. En Ciencias Nutricionales



Laboratorio de Bioquímica II

Práctica 1
Grupo: 03
Equipo 04:














OBJETIVO:
Observar la gran actividad de la catalasa normal e inhibida y de la enzima Deshidrogenasa Láctica también normal e inhibida e identificar dependiendo de los resultados de la reacciónsus dos estados de observación.


ANTECEDENTES:
Actividad enzimática: La actividad enzimática es una medida de la cantidad de enzima activa presente y del nivel de actividad de la misma
Reacción de la Catalasa:
La catalasa es una enzima antioxidante presente en la mayoría de los organismos aerobios. Cataliza la dismutación del peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno. La mayoría deestas enzimas son homotetrámeros con un grupo hemo en cada subunidad. Se ha determinado la estructura cristalográfica de nueve catalasas. Algunas catalasas tienen subunidades pequeñas (masa molecular ≈ 60 kDa) y otras grandes (masa molecular > 80kDa). Entre estos dos tipos de catalasas existen diferencias estructurales importantes. Las catalasas pequeñas son menos resistentes a ladesnaturalización, unen NADPH, tienen hemo b y se inhiben e inactivan por sustrato. En cambio, las catalasas grandes tienen un dominio extra en el C-terminal que es semejante a la flavodoxina, son muy resistentes a la desnaturalización, tienen hemo d, presentan enlaces covalentes inusuales cercanos al sitio activo y son resistentes a concentraciones molares de H2O2.
Reacción de la Deshidrogenasa Láctica:
Laenzima Lactato deshidrogenasa se encuentra concentrada en el corazón, riñon, hígado, músculo y otros tejidos corporales. El daño a alguno de estos tejidos resulta en un aumento de los niveles séricos de LDH.
La enzima LDH cataliza la reacción reversible de lactato a piruvato, pudiendo utilizarse ambos como sustrato. Este reactivo se basa en el método de Wacker & Amador, y las modificacionesposteriores de Gay, Mc.Comb y Bowers, tendientes a mejorar la linealidad del método y la duración del reactivo. L-Lactato+NAD+ LDH > Piruvato +NADH + H+ En este caso, la enzima cataliza la oxidación de lactato a piruvato reduciendo el NAD a NADH.



PROCEDIMIENTO:


























OBSERVACIONES Y RESULTADOS
CATALASA
Tubo/reactivo
H2O2 3%
NaCN 5%
PbNO3 5%Sangre diluida hervida
Sangre diluida cruda
Al instante
A los 5 minutos
1
2 ml



3 ml
Color rojo obscuro / pocas burbujas
Color rojo obscuro / muchas burbujas
2
2 ml


3 ml

Ligeramente café y turbio
Color amarillo turbio / denso
3
2 ml
10 gotas


3 ml
Color rojo vivo / burbujas
Color rojo vivo / espuma ligera
4
2 ml

10 gotas

3 ml
Cristalino con borde rojo /burbujas
Color amarillo claro / burbujas densas

¿Cuál fue la diferencia entre el tubo de la reacción normal y los tubos con la reacción inhibida?
Inhibición con cianuro: Presentó cambios de coloración y espuma
Inhibición con nitrato de plomo: Cambió ligeramente la coloración y presentó espuma
Inhibición con calor: Cambió su densidad y color







DESHIDROGENASA
Tubo/
reactivo
Azulde metileno 0.02%
Lactato de sodio 5%
Suspensión de levadura hervida
Suspensión de levadura cruda
3 minutos
6 minutos
9
minutos
1
3 gotas
10 gotas

5 ml
Azul ligeramente combinado
Cambio de color / Separación con borde azul
Espuma azul
2
3 gotas

5 ml

Ligeramente separados
Azul / Siguen separandose
Muy separado / Azul abajo
3
3 gotas


5 ml
Azul / Mezclados
Bordeazul / Sedimento azul
Borde azul / No hay espuma

Tiempo para que la reacción se completara en el tubo 1: 3 minutos
Tiempo para que la reacción se completara en el tubo 2 : No se completó por uso del inhibidor
Tiempo para que la reacción se completara en el tubo 3: 6 minutos
Conclusión:
Al utilizar el lactato de sodio 5% la reacción se lleva a cabo más rápidamente, así como al utilizar...