DESHIDROGENASA LACTICA

TEMA: DESHIDROGENASA LACTICA.

FUNDAMENTOS: Una de las coenzima mejores conocidas en reacciones de oxidación-reduccion es el DPN (difosfopiridin nucleótido) o coenzima I. Su oxidación y reducciónesta predeterminada por enzimas del grupo de la “flavoproteinas”. Una vez oxidada, la enzima reducida cede sus dos hidrógenos a un receptor adecuado. En el laboratorio este receptor adecuado es elazul de metilenol el cual, si la reacción se hace en medio anaeróbico se convierte a blanco de metileno- forma reducida del azul de metileno-que es incoloro. Al probar la actividad de ladeshidrogenasa láctica, el piruvato, producto de la reacción, se “fija” por medio de KCN para que la reacción llegue hasta su termino.
Reactivos:
1.-Eter dietilico
2.-cloruro de sodio al 0.9%
3.-Arena deOttawa
4.-Cianuro de potasio al 0.5% veneno.
5.-lactato de sodio al 1%
6.-Azul de metileno al 0.01%
7.-Aceite mineral
Aparatos:}
Baño maria a 37*C
Centrifuga

A.Preparacion de la coenzimaInmediatamente después de sacrificar al animal que se habrá anestesiado previamente con éter obtengase un fragmento de unos 20 gramos de musculos de la pata trasera y colóquese una vez picado con tijerasen agua hirviendo en la proporción de 8 mil de agua por gramo de musculo en un matraz de tamaño adecuado que se colocara en el vaso que hara las veces de baño de maria, dispuesto a su vez , en unaparrilla.
Despues de 5min, enfriese la preparación y pasese a un mortero añádase un volumen de arena parecido al q ocupaba el musculo y muelase bien. Centrifuguese y colóquese el sobrante en un frascoetiquetándolo. “coenzima I”
B.Preparacion de la enzima.
Tomense otros 20 gramos de musculo del animal y agréguense 10ml de cloruro de sodio al 0.9% por cada gramo de musculo tomado. Añadasesuficiente arena para moler en un mortero y dejese reposar en el mortero durante una hora. Centrifuguese y conservese el sobrenadante como “Deshidrogenasa láctica”
C.Demostracion de la activiada
Tubo...