desifeccion dde quirofano

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA


FOTOMETRÍA




JUAN DANIEL DANGOND
ANGELICA MARIN
ZARIANA REYES
DANIS RUMBO
HIDELIS SIERRA














DOCENTE:

MARTÍN NÚÑEZ CANTILLO











U N I V E R S I D A D P O P U L A R D EL C E S A R
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
SEMESTRE III
VALLEDUPAR-CESAR

ÍNDICE DE EXPERIMENTOS:

1. Determinación delEspectro de Absorción De Azul De Evans.
2. Demostración de la Ley de Beer.
3. Determinación fotométrica de la hemoglobina.

Objetivo:

Demostrar las leyes que fundamentan los análisis fotométricos y su aplicación a la Bioquímica Clínica.

Experimentos:

Experimento 1: Determinación del Espectro de Absorción De Azul De Evans.

Objetivos:

Seleccionar la longitud de onda a la cual, lasolución de Azul De Evans, presenta la máxima absorción. Evans

Practicar el manejo del fotocolorímetro.

Cada sustancia presenta una absorción máxima a una determinada longitud de onda. Para seleccionar la longitud de onda optima para una determinada sustancia, es preciso construir una curva que relacione densidades ópticas (D.O) con longitudes de onda.

Experimento 2: Demostración de la Leyde Beer.

Objetivo:

Observar el cumplimiento de la ley de Lambert y Beer en la curva de calibración del azul de Evans.















INTRODUCCION

Al usar cualquier método colorimétrico es indispensable conocer la sensibilidad de éste y el rango en que el color desarrollado en la solución es directamente proporcional a la concentración del soluto.

Para cumplir estospropósitos, una vez se ha seleccionado la longitud de onda de máxima absorción, se efectúan los ensayos con varias soluciones con concentraciones de la sustancia. Se determina por cada una de ellas la absorbancia a la longitud de onda de marisma absorción. Se trata la grafica que debe relacionar la concentración de sustancias (eje X ó abscisa) con las lecturas de densidad óptica (D.O) ó deporcentaje de transmitancia (eje de la Y u ordenada). Mediante esta gráfica se puede determinar la concentración de cualquier solución problema de la misma sustancia. Si la gráfica da una línea recta se cumple la Ley de Beer.

Método: Medir en el fotocolorímetro la intensidad del color de soluciones de Azul de Evans de concentraciones diferentes y conocidas.

Procedimiento: A partir de la solución deAzul de evans (50mg/100ml) prepare una serie de diluciones a las siguientes concentraciones: 0,125mg/100ml; 0,250mg/100ml; 0,500mg/100ml; 0,750mg/100ml; 1,0mg/100ml. Lea el % T ó la absorbancia de cada una de las disoluciones a la longitud de onda que dio la máxima absorción, graduando al fotocolorímetro con agua destilada.

Manteniendo fija la concentración de la disolución con su “blanco”adecuado, se hace variar la longitud de inda efectuando las lecturas de la densidad óptica que corresponda a cada caso.
Llévense los resultados sobre una gráfica que debe relacionar la longitud de onda (eje de las X ó abscisas) con las lecturas de densidad óptica (eje de las Y u ordenadas), en el papel milimetrado.

En el punto en que la absorción de máxima, existe la máxima sensibilidad y lalongitud de onda corresponda a dicho punto será la conveniente.

Método: Medición fotométrica de la intensidad del color de una solución de Azul de evans a diferentes longitudes de onda.

Materiales: Fotocolorímetro, solución madre Azul de Evans 50mg/100ml.

Procedimiento: En un matraz aforado de 100ml colocar 1ml de la solución madre Azul de Evans y afores con agua destilada.

Dé laabsorbencia (D.O) de la solución a las siguientes longitudes de onda: 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640.

Recordar que cada vez que se cambie la longitud de onda es necesario graduar el instrumento a 100% (transmitancia) con agua destilada como “blanco”.


Expresiones de resultados: Anotar la transmitancia para cada longitud de onda señalada. Utilizando la “Tabla de Conversión”...