Detecci N De Proteinas Por ELISA

Detección de proteinas por ELISA
Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay
El analito es todo lo que se mide en una prueba de laboratorio, el analito puede ser tanto un
anticuerpo o un antigeno, losanticuerpos poseen una alta especificidad y afinidad para un
antigeno especifico.
Un antigeno es una sustancia que desencadena la formación de anticuerpos y puede causar una
respuesta inmunitaria, losantigenos son usualmente proteinas o polisacaridos.
Un anticuerpo son glicoproteinas.
El ELISA se basa en el uso de antigenos marcados con una enzima, de forma que los conjugados
resultantes tengan actividadtanto inmunologica como enzimatica. Al estar uno de los
componentes ya sea antigeno o anticuerpo, marcado con una enzima e insolubilizado sobre un
soporte la reacción antígeno-anticuerpo quedarainmovilizada y por tanto sera facilmente
revelada mediante la adicion de un substrato especifico que al actuar con la enzima producira un
color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso deun espectofotómetro o un
colorímetro.
Hay diferentes tipos de ELISA:
-

Anticuerpos marcados: - ELISA directo, ELISA indirecto, ELISA sandwich doble (DAS) y
heterologo (HADAS)
Antígeno marcado: -ELISA competitivo

ELISA Directo etapas:
• Fijación al soporte insoluble tapizado de antígenos específicos. Lavado para eliminar los
antígenos fijados deficientemente o no fijados.
• Adición deanticuerpos marcados con una enzima; si los anticuerpos reaccionan con los
antígenos, el complejo quedará solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que
no hayan reaccionado.
• Adición de unsubstrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la
reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado
ELISA Indirecto etapas:
• Fijaciónal soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos objeto de estudio.
Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados.
• Adición del suero problema, de tal...