Deteccion de algunos ompuestos medicinales mediante tlc

Detección de Algunos Compuestos Medicinales en TLC

Extraido de:
“Estudio Fitoquímico Exploratorio de Peperomia uchumatanica Véliz y Peperomia moralesii Véliz (Piperaceae), Especies Endémicas de Guatemala”
Informe de tesis
Presentado por:
Ellen Yvette Aguilar Ovando
Para optar al título de:
Química
Universidad de San Carlos de Guatemala
Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia
pp.29-37

1. Procedimientos:
Etapa 1: identificación y obtención de material vegetal fresco
Identificar in situ –basándose en caracteres morfológicos específicos– y obtener el material vegetal, mediante colecta directa de las plantas en su hábitat natural (en la meseta de Todos Santos Cuchumatán), con asesoría del Ing. Agr. Mario Véliz. Transportar el material colectado en bolsas negras grandescon pequeñas perforaciones para permitir la ventilación del contenido (evitando exponerlo al sol o macerarlo). Limpiar manualmente el material vegetal de fragmentos de otras plantas, hojas podridas, tierra u otros elementos que puede traer adheridos.
Etapa 2: secado y molienda
Secar todas las partes aéreas y raíz del material vegetal colectado ya limpio, a temperatura ambiente y en sombra, o deser necesario, en horno con salida de vapor a temperatura inferior a 55ºC. Una vez seco, molerlo manualmente hasta donde sea posible, y con ayuda de un procesador de alimentos, cuchillos u otros accesorios cortantes, según sea necesario. Luego, cerner con ayuda de un tamiz a partículas semifinas (con tamaño de partícula < 355 μm, correspondiente a Tamiz No. 35 o menor –de acuerdo a laclasificación estadounidense–).
Etapa 3: determinación cualitativa de familias de metabolitos secundarios
a) Investigación de esteroides o triterpenoides: Reacciones de color
Liebermann Burchard: a 0.5 g de muestra seca colocados en un tubo de ensayo, aplicar unas gotas de ácido acético y 3 mL de anhídrido acético-ácido sulfúrico (50:1). Resultado: desarrollo de coloración rosa o púrpura indicasaponinas triterpenoidales; colores verde y azul verdoso indican posibles esteroides conteniendo 2 enlaces C=C conjugados o formados por deshidratación con ácido sulfúrico.

Ácido tricloroacético: a 0.5 g de muestra seca colocados en un tubo de ensayo, añadir unos cristales de ácido tricloroacético y esperar aproximadamente 3 minutos. Resultado: desarrollo de coloración naranja, rojo o rojooscuro es indicativo de triterpenos tetracíclicos; esteroides desarrollan color a 60°C; triterpenos pentacíclicos a 110°C.

Carr-Price: agrega 2 mL de tricloruro de antimonio al 30% p/v en cloroformo (ver preparación en Anexo 4, inciso a) a 1 mg de muestra en cloroformo. Resultado: desarrollo de coloración azul, indicando posibles derivados del colestano con dieno o trieno potencial en anillos A yB.

b) Investigación de saponinas:
Prueba de espuma: preparar tres tubos de ensayo de la siguiente manera:

Tubo 1: 100 mg de material vegetal pulverizado y seco.
Tubo 2: : 2 mL de estándar de saponina 0.5 % p/p en agua (control positivo de saponinas).
Tubo 3: 2 mL de agua (control negativo de saponinas).
A cada tubo adicionar 10 mL de agua destilada y calentar en baño de maría a60°C durante 30 minutos. Dejar enfriar los tubos y taparlos con parafilm. Luego, agitarlos vigorosamente 30 a 40 segundos y observar la formación de una capa de espuma. Dejar reposar los tubos durante 30 minutos. Si una capa de espuma mayor de 3 cm persiste en la superficie líquida después de 30 minutos se presume la presencia de saponinas.

Prueba de Hemólisis: con un marcador indeleble trazarlíneas en el fondo (por fuera) de la caja de Petri que contiene el agar sangre, que dividan su área en 4 espacios simétricos. Identificarlos respectivamente como “muestra 1”, “muestra 2”, “control de saponinas” y “blanco”. Cortar y extraer un pequeño bocado de agar en cada espacio separado, con ayuda del extremo grueso de una micropipeta. Utilizando una micropipeta para cada muestra, agregar una...