deteccion de eventos raros en citometria de flujo

GUIA PARA LA DETECCIÓN DE EVENTOS RAROS

CONCENTRACIÓN DE LA MUESTRA Y VELOCIDAD DE FLUJO.
Debido a que lo eventos raros son muy baja frecuancia , se debe aseguara el procesamiento de la muestrapara enriquecer los eventos de interés. La muestra puede ser enriquecida por dos vías.
Incrementando la concentración de la muestra: se pueden enriquecer o aisar la población de interés porsearación inmunomagnetica.
Incremento en el umero de evnto totales que se deben adquirir. La frecuencia de la población dde interés determina el número total de células que debn ser adquiridas.
El tiempo deadquisiscíon podría modificarse para acortarse aumentando el rango de fujo, sin embargo esto colleva un incremento en la presion, lo que incrementa la posibilidad de que se adquieran 2 células almismo tiempo, lo tambien incrementa el coeficiente de variación. En este caso se pueden adicionar parametros que distingan dobletes.
Para umentar la eficiencia en la identificacion de los eventos deinterés es activar o adicionar el umbral de fluorescencia, determinados por poblacion positiva, en el cual eventos por debajo de este umbral no sean vistos por el citometro, lo que requiere que loseventos positivos sean brillantes. Es por ello que se reservan fluorocromo brillantes para estas poblaciones.
RELACION SEÑAL-RUIDO.
El ruido puede dificultar la identificación de eventos con bajafrecuencia. Por ello es necesario aumnetr la relación señal- ruido. Es esta aspecto se debn tomar encuenta dos factores importantes:
Que la diferencia de la intensidad de fluorescencia entro la poblacionpositiva y la negativa sea elevada.
Dispersión baja entre estas dos poblaciones.
Lo primero se logra disminuyendo la autofluorescencia , tambien reservando lo fluorocromos mas brillantes como PE paraesta población. La realción señal ruido también se puede aumentar si las células teñidas se conjugan con perlas. Otra estrategia para detrminar la poblacion es excluir poblaciones de no...