Deteccion De Microorganismos

|C-096 |PROCEDIMIENTO DE IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS. |VTO 05/13 |REV 06 |


1. OBJETIVO:
Establecer, detalladamente, la metodología de trabajo para realizar la tipificación de microorganismos.
2. REFERENCIAS:
Farmacopea Argentina 7ma edición USP vigente Manuales de interpretación BioMerieux3. DEPARTAMENTOS INVOLUCRADOS:
Control de Calidad (Microbiología)
4. RESPONSABILIDADES:
Es responsabilidad de los profesionales y técnicos del sector, el estricto cumplimiento de este procedimiento.
5. FRECUENCIA: Cada vez que sea necesario la identificación de un microorganismo.
6. PROCEDIMIENTO:
6.1. Introducción:
Los ensayos de identificación que se describen, están basados en lascaracterísticas microscópicas, microscópicas y bioquímicas de los distintos microorganismos.
Para tipificación bioquímica se pueden utilizar sistemas comerciales, en nuestro caso, los sistemas API (Analíticas Profile Index) de BioMerieux.
El analista deberá aplicar el sentido común en cada paso a realizar y utilizar el mínimo número de test para llegar a la identificación, deberá observarcaracterísticas distintivas del crecimiento del microorganismo, como por Ej. la pigmentación. Para una buena identificación utilizar toda la información de origen, usar medios de cultivo controlados y estériles, asegurarse de la pureza del cultivo, testear el requerimiento de oxigeno, glucosa, etc.
6.2. Definiciones:
Galería API: consta de microtubos que contienen los sustratos deshidratados. Lostest se inoculan con una suspensión bacteriana que rehidrata los medios. Durante la incubación el metabolismo de la bacteria produce cambios de color, ya sea espontáneos o bien al añadir los reactivos.
La lectura de las reacciones se hace de acuerdo con el manual del fabricante.
6.3. Materiales y equipos:
Ansa de platino recta y con aro
Mechero y línea de gas
Placas de petri conteniendoagar TSA
Placas de petri conteniendo agar SDA
Estufa de incubación controlada, de (32,5 ± 2,5) °C
Estufa de incubación controlada, de (22,5 ± 2,5) °C
Estufa de incubación controlada, de (32-37) °C
Estufa de incubación controlada, de (50-65) °C
Agua destilada
Portaobjetos
Solución de Cristal-Violeta, según Gram.
Solución de Lugol, según Gram.
Solución decolorante, según Gram.
Solución deSafranina, según Gram.
Aceite de inmersión
Microscopio óptico
Jarra y sistema de anaerobiosis
Kit API Staph y su manual de instrucciones e interpretación
Kit API 20 E y su manual de instrucciones e interpretación
Kit API 20 NE y su manual de instrucciones e interpretación
Kit API 50 CH/ 50 CHB y su manual de instrucciones e interpretación
Kit Api Candida y su manual de instrucciones einterpretación
Reactivos para la revelación de kits API (ver manual de instrucciones)
Sistema Apiweb, para lectura de los kit API.
Cámaras de incubación
Medios de cultivo nutritivos y diferenciales.
Solución fisiológica
Glicerina estéril.
Micropipetas estériles.
Gradilla.
Autoclave Chamberlain y bolsas para decontaminacion.
Paños y Soluciones desinfectantes
Reactivo de catalasa y oxidasaCaldo Voges-Proskauer
Agar para crecimiento de anaerobios
Agar SPS
Solución de NaCl al 2 y 7,5 %:
Caldo glucosa
Agar almidón.
Agar Citrato de Simmons
Agar Fenilalanina
Agar Gelatina nutritiva
Agar Urea
Medio para test de movilidad
Medio basal O/F
Agar test de DNAsa
Agar hierro tres azucares
Lactofenol-azul
Verde malaquita
6.4. Descripción:
6.4.1. Información y aislamiento dela colonia.
Una vez encontrada o determinada la colonia a identificar, repicar asépticamente, con un ansa estéril y enfriada, en una placa conteniendo agar TSA estéril, en incubar 24 hs en una estufa a (32,5 ± 2.5) °C. Si se tiene el indicio de que la colonia es un hongo, repicar en una placa conteniendo agar SDA estéril en incubar 5 días en una estufa a (22,5 ± 2.5) °C. Rotular la placa con...