Deteccion De Patogenos Elia Pcr Inmonuflorescencia

Pruebas para Deteccion de Patogenos en Alimentos





Se entiende por identificación microbiana al conjunto de técnicas y procedimientos que se aplican para establecer la identidad de un microorganismo. Estas técnicas se utilizan en diferentes áreas, por ejemplo:

 En el área clínica donde es de capital importancia conocer cuál es el agente causal de la infección que presenta unpaciente, de manera de poder tratarlo con agentes terapéuticos.

 En la industria farmacéutica, cosmética y de alimentos donde las normas de control de calidad exigen la ausencia de ciertos microorganismos.

 En investigación básica donde se aísla un determinado microorganismo que debe identificarse para comprobar si se trata de un microorganismo conocido o de uno nuevo para poder clasificarlo.Los métodos más utilizados para la identificación microbiana, los podemos clasificar en:

1. Métodos basados en criterios morfológicos

2. Métodos basados en tinción diferencial

3. Métodos basados en pruebas bioquímicas

4. Métodos basados en tipificación con fagos

5. Métodos basados en pruebas serológicas

6. Métodos basados en detección molecularDETECCION DE PATOOGENOS EN ALIMENTOS
La detección y la enumeración de microorganismos en alimentos o en superficies que tienen contacto con alimentos constituyen una parte importante de cualquier esquema de control de calidad. Debido a esto es necesario implementar técnicas de detección para efectuar la vigilancia y el control de dichos microorganismos y prevenir las enfermedades queéstos producen. El establecimiento de medidas de control apropiadas requiere de métodos confiables de diferenciación entre bacterias patógenas y no patógenas,

*Entre estos métodos o técnicas destacan la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
-La invención de la reacción en cadena de la polimerasa permite la amplificación selectiva de secuencias específicas de ADN que se encuentran encantidades muy pequeñas. Como su nombre indica, se basa en la actividad de la enzima ADN polimerasa que es capaz de sintetizar una cadena de ADN complementaria a otra ya existente. El método de PCR utiliza dos secuencias cortas de oligonucleótidos llamadas iniciadores o cebadores que son complementarios a los extremos de la región de ADN que se pretende amplificar. Dado que en cada reacción ambas cadenasde ADN pueden servir de molde para la síntesis de su cadena complementaria, el número de eventos de replicación está dado por la expresión 2n, donde n es el número de ciclos de amplificación. Puede notarse que después de 20 ciclos se tendrán más de un millón de copias del ADN original. Una explicación amena y detallada de la PCR se puede encontrar en Müllis (1999). Uno de los factores que llevanal éxito en la implementación de la PCR para la identificación de microorganismos patógenos es la elección correcta de la secuencia blanco. Esta secuencia debe permitir la identificación del microorganismo de interés independientemente de la presencia de otras fuentes de ADN (de microorganismos concomitantes o de la muestra misma). Las diferencias en la secuencia de genes ortólogos
pueden servircomo herramienta útil en la tipificación de diferentes cepas y serotipos de una misma especie o de especies cercanas filogenéticamente.



VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA PCR

Las principales ventajas del uso de la PCR en la detección e identificación de bacterias causantes de ETA radica en tres aspectos fundamentales: su sensibilidad, suespecificidad y su capacidad de procesamiento de grandes cantidades de muestras. Actualmente existen métodos de PCR establecidos para la detección de bacterias específicas que logran detectar niveles muy bajos de microorganismos, por ejemplo, para E. coli se ha reportado la utilización de medios de enriquecimiento seguidos de PCR para la detección de 1 UFC/g de carne de res (15 h de enriquecimiento) y...