DETECCION DEL DOPAJE


DETECCION DEL DOPAJE (ESTEROIDES)

 INTRODUCCIÓN

Por definición la palabra dopaje hace referencia a la administración de fármacos o sustancias estimulantes para potenciar artificialmente el rendimiento del organismo con fines competitivos. Debido a ello los esteroides se encuentran en la lista de sustancias prohibidas que anualmente emite la Agencia Mundial Antidopaje (WADA).

Estoscompuestos se excretan en orina mayormente como conjugados y en particular, como glucurónidos. Gracias a ello en los laboratorios se puede saber si un deportistas ha utilizado esteroides mediante un control de dopaje en orina. Su análisis se realiza mediante el uso de métodos analíticos de alta selectividad y sensibilidad. La técnica empleada es la cromatografía de gases acoplada a la espectrometría demasas (es una técnica experimental que permite la medición de iones derivados de moléculas, sabiendo de qué tipo de moléculas se trata).

 Cromatografía de gases-espectrometría de masas (CG-MS)

La baja concentración, la presencia de glucoconjugados, el modo de excreción (gluco conjugados) no facilitan la detección de los analitos por cromatografía de gases, por lo que antes de realizar dichatécnica hay que hacer una previa preparación de las sustancias que queremos analizar.

Durante el proceso se conoce el estado en que se encuentra la muestra, puesto que se hacen controles para garantizar la calidad de los resultados. Todos los resultados que se van obteniendo se registran en un informe para el equipo investigador.


En la CG/MS no solo se analizan esteroides anabólicos, sino tambiénotro tipo de sus dopantes, que por su estructura y comportamiento se han podido incluir por este método.



El método consiste en:


1.Hidrólisis
La hidrólisis a 55ºC durante una hora, se realiza al pH de actuación de la enzima alfa-glucuronidasa (pH7), para romper los enlaces entre el compuesto y el ácido glucurónico (sustancia que nos dirá si es positivo o negativo)


2. Extracción y secadoExtracción con éter a pH11 (pH óptimo para la extracción de la mayoría de los compuestos)
Lo que se consigue en este paso es traspasar a la fase orgánica los compuestos de interés, purificar y concentrar.

3.Derivatización
Se bloquean los grupos termolábiles para mejorar las propiedades cromatográficas. Las muestras se calientan media hora a 65ºC.

4. Comparación
Se analizan los resultadosobtenidos y se observa si la concentración de glucurónidos es superior o inferior al límite de permisividad.

Por lo general los esteroides que se detectan en este análisis y que además tienen límite de positividad según la AMA son la testosterona, epitestosterona, DHEA, androsterona, etiocolanolona y la relación T/E (Relación testosterona y epitestosterona)

Si la concentración es superior al límitede seguridad el deportista tiene una segunda oportunidad, se pasa a analizar por combustión isotópica c12/c13 (Como la testosterona exógena o precursores contienen menos 13C que sus homólogos endógenos, se espera que los esteroides urinarios, con una alta 13C/12C procedan de origen farmaceútico. El valor 13C/12C de testosterona o de sus metabolitos se mide y se compara con la de los esteroidesurinarios referencia dentro de la muestra a tomar en cuenta la variación en la dieta de un atleta.
Una vez analizada la combustión isotópica se da por finalizada el análisis y se pasa a comprobar el resultado; si es positivo, negativo o no concluyente.


FUTUROS ESTUDIOS
Detección de ésteres de testosterona en plasma y los pelos también han sido sugeridos como soluciones prometedoras para disuadira dopaje con las preparaciones inyectables. Sin embargo, los conocimientos sobre el dopaje son todavía limitados en muestras de plasma para la detección con estas sustancias. En cuanto al análisis del cabello, se ha encontrado que los ésteres T están mal almacenados en los pelos y por lo tanto, sólo el uso masivo y repetido de estas sustancias se pueden detectar en esta matriz biológica

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