Detección de actividad enzimática

INDICE

SESIÓN 1
PROPÓSITO……………………………………………………………..I
INTRODUCCIÓN………………………………………………………..II
MATERIALES…………………………………………………………...III
PROTOCOLO………….……………………………………………….IV
RESULTADOS…………………………………………………………..V


SESIÓN 2

MATERIALES………………………………………………………......VI
PROTOCOLO………….……………………………………………....VII
RESULTADOS………………………………………………………...VIII
DISCUSIÓN………………………………………………………….…..IXCONCLUSIONES…………………………………………….……...…..X
ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA……………………………………..XI
BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………..XII

Sesión 1
I.- PROPÓSITO
Desarrollar la habilidad para detectar la actividad de enzimas en el laboratorio.
II.- INTRODUCCION
Las enzimas son biocatalizadores, en su mayoría proteínas. Estas poseen estructuras tridimensionales que en un medio adecuado de pH, salinidad, temperatura ygeneralmente en presencia de cofactores son capaces de disminuir la energía de activación para que una reacción química se lleve a cabo. La transformación de los sustratos en productos sin la alteración aparente de la enzima se realiza en un sitio específico denominado sitio activo, el sitio activo de las enzimas es una especie de receptáculo molecular donde se realiza la unión del substrato, tieneuna disposición geométrica específica y una dotación de cargas e hidrofobicidad particular, lo que permite que las enzimas tengan ciertos grados de especificidad. Dentro del sitio activo se encuentra el centro catalítico, que incluye aminoácidos específicos en orientaciones determinadas, que interactúan en conjunto para permitir llevar a cabo la catálisis enzimática. La arquitectura general de laenzima puede variar poco o mucho entre diferentes especies o formas de la enzima, pero la arquitectura del sitio activo y del centro catalítico es bien conservada, lo que permite conservar la actividad enzimática pero variar la especificidad, la estabilidad, la interacción con otras moléculas, etc.
Para que la actividad enzimática se realice de manera óptima sobre un sustrato específico debenexistir condiciones de temperatura y pH determinadas, en ocasiones se requiere la adición de iones metálicos o cofactores como Ca, Mg, Fe, Zn, Cu, NAD, NADPH, coenzimas, etc. La actividad normalmente puede ser seguida mediante la tasa de formación de producto o mediante la tasa de desaparición de sustrato, según sea el caso. Esto es quiere decir que se mide cuanto producto se forma o cuanto sustratose consume durante un tiempo determinado a una concentración de enzima determinada (la cual se encuentra en un medio adecuado a una temperatura adecuada), estos parámetros son considerados en los estudios de cinética enzimática para establecer las constantes de interacción con el sustrato, las velocidades de reacción, y otros parámetros que nos permiten entender cómo se realiza una reacción, conlo cual se puede plantear la manipulación de la reacción para hacerla más rápida, usando mayores cantidades, etc.
Las enzimas son consideradas como elementos importantes en la industria ya que estas se encuentran involucradas en numerosos procesos que permiten obtener productos y subproductos de formas muy eficientes. Las podemos encontrar en la industria alimenticia, industria de detergentes ylimpiadores, industria farmacéutica, industria cervecera y relacionados, industria peletera, industria cosmética sin mencionar la industria de investigación. Se calcula que las enzimas generan una derrama económica por arriba del orden de varios cientos de millones de dólares; para el 2009 se manejan cifras que alcanzan los 2.4 billones de dólares (Hasan et al., 2006).
La investigación paramejorar los procesos industriales se basa normalmente en buscar nuevas formas de enzimas que generen mejores resultados. Para esto existen dos formas generales para encontrar candidatos. Una es la búsqueda de enzimas en fuentes naturales y la otra es utilizar la ingeniería de proteínas para crear enzimas recombinantes con modificaciones dirigidas, en ambas estrategias se pretende encontrar enzimas...