determinaacion de actividad enzimatica

Determinación de la actividad enzimática y parámetros cinéticos de la catalasa.

Objetivos
Observar la actividad de la catalasa y el efecto de algunos inhibidores como nitrato de plomo, al igualque el efecto de las temperaturas altas.
Determinar los parámetros cinéticos de la reacción enzimática.

Metodología

Actividad enzimática
En un matraz aforado de 100 mL decantar 25 mL deBuffer Fosfatos 0.02 M pH 7.0 a 0 C, posteriormente agregar 0.3 ml de sangre a 0 C y aforar el volumen de la solución a 100 mL (Enjuagar perfectamente la punta de la pipeta), mantener la soluciona 0 Cdurante todo el ensayo.
Decantar 7 ml de H2O destilada en 5 matraces de 25 mL, posteriormente agregar 2 mL de H2O2 0.05 M a cada uno de los matraces; en el primer matraz agregar 2 ml de H2SO4 2 N ehinmediatamente agregar 1 mL de la enzima, al matraz dos agregar 1 ml de la enzima e inmediatamente 2 mL de H2SO4 2 N, al matraz 3 agregar 1 mL de la enzima y esperar 5 min posteriormente agregar 2ml de H2SO4 2 N, al matraz 4 agregar 1 ml de enzima a 50 C y esperar 5 min para agregar el H2SO4 2 N, al matraz 5 agregar 1 mL de la enzima y 0.5 mL de Pb(NO3)2 al 5% y esperar 5 min para agregarel H2SO4 2 N. todos los matraces (a excepción del matraz 4) deben de mantenerse a 0 C durante toda la reacción. Finalmente titular el H2O2 restante en el matraz con KMNO2 0.05 M.

Determinación deparamentos cinéticos.
En un matraz de 100 ml agrega 15 ml de H2O2 0.005 M y 52.5 mL de H2O destilada, posteriormente agregar 7.5 mL de la enzima obteniendo un volumen final de 75 mL, tomar unamuestra en otro matraz de 10 mL cada 3 min 6 veces y tomando una séptima muestra pasados 25 min y agregar H2SO4, finalmente titular el H2O2 restante en el matraz con KMNO2 0.05 M. Repetir esteprocedimiento a diferentes concentraciones de H2O2 (0.05, 0.5, 1 M).

Resultados
Calcular la constante de velocidad (k), la velocidad de reacción a las diferentes concentraciones de H2O2, Km y Vmax,...