DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: ENZIMAS DIGESTIVAS


PRÁCTICA 6. LABORATORIO
DE BIOQUÍMICA








































CUANTIFICACIÓN DE
PROTEÍNAS (Lowry)



DIANA BENAVIDES // 20122181057
ENIKÖ NAGY // 20122181201

INGENIERIA SANITARIA



UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS FACULTAD DEL MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES INGENIERIA SANITARIA.LABORATORIO DE BIOQUÍMICA PRÁCTICA 6: PROTEÍNAS






DIANA BENAVIDES
20122181057
ENIKÖ NAGY
20122181201







PRESENTADO A: DOCENTE: DEYSI BELTRAN











2014

1. RESUMEN


A menudo se desea conocer el contenido de proteína de varios elementos o materiales biológicos. Se han desarrollado varios métodos para la estimación cuantitativa de las proteínas. Entre losmétodos calorimétricos destacan tres: el método de Biuret, el método de Lowry y el método de Azul de Coomasie. El método de Lowry Tiene la ventaja de ser extremadamente sensible, capaz de detectar cantidades del orden de 10 microgramos de proteína, se forma un complejo coloreado de cobre con el enlace peptídico; además del complejo anterior también se forma un derivado de las tirosinas que contribuyea la absorbancia total; como desventaja, es afectado por un amplio rango de compuestos no proteicos como EDTA, sulfato de amonio, Tritón X-
100. Sin embargo existen variables que
pueden realizarse para evitar estas interferencias, que están disponibles comercialmente. Para determinar la concentración de proteína total presente en una muestra se requiere la preparación de una curva decalibrado empleando una proteína patrón. Teóricamente solo se requiere la medida de absorbancia de un patrón de concentración conocida, como calibrado para la cuantificación. Para determinar la concentración de proteínas en una solución se utiliza la ley de Lambert-Beer.


Palabras claves: absorbancia, espectrofotómetro, curva de calibración, proteína, ley de Lambert-Beer.


1.2. Abstract.Often you want to know the protein content of various elements or biological materials. Several methods have been developed for quantitative estimation of proteins. Among the colorimetric methods are three: the Biuret method , the method of Lowry and Coomassie Blue method . Lowry's method has the advantage of being highly sensitive , capable of detecting amounts of theorder of 10 micrograms of protein, a copper colored complex with the peptide bond formed ; besides the above complex tyrosine derivative contributes to the total absorbance is also formed; a disadvantage is that it is affected by a wide range of non-protein compounds such as EDTA, ammonium sulfate, Triton X-100. However, there are variables that can be done to avoid this interference, which arecommercially available. To determine the total protein concentration present in a sample to prepare a calibration curve using a standard protein is required. Theoretically only the absorbance measurement of a standard of known concentration as a calibration for quantification is required. To determine the protein concentration in a solution the Beer-Lambert law is used .


Keywords:absorbance, spectrophotometer, calibration curve, protein, the Beer-Lambert law.

2. INTRODUCCIÓN


Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo y esenciales para la vida. Actúan como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación, etc. Laproteína más abundante en plasma es la albúmina. Una de sus funciones más importantes es la de permitir el transporte de ácidos grasos, hormonas esteroides, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son insolubles en medio acuoso.La concentración de albúmina en plasma influye notablemente en el mantenimiento de la presión coloidosmótica, lo que estaría relacionado con su...