DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE MÉTODO DE SANGER


QUINTERO RAMÍREZ MARIO ALBERTO
SEC. 2 GRUPO: 20M1
PRACTICA No 1.
DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE MÉTODO DE SANGER

INTRODUCCIÓN
En1975, Frederick Sanger desarrolló el método de secuenciación de ADN conocido como método de Sanger.
El DNFB se utiliza para la determinación en péptidos y proteínas de los aminoácidos con el grupo alfaamino libre, el DNFB se combina con la amina del aminoácido liberándose ácido fluorhídrico y se forma un dinitrofenilaminoacido, esta reacción se puede utilizar para establecer la identidad del aminoácidoterminal de una proteína portadora del grupo amino libre y también es muy útil para conocer el n número exacto de cadenas que contiene una molécula de proteína puesto que la reacción se produce congrupos amino libre. Los DNP de aminoácidos terminales, a diferencia de los demás DNP y de los aminoácidos libres, son no polares por lo que se pueden extraer muy fácilmente con un disolvente no polar.Estos DNP de aminos terminales son sometidos a una cromatografía en capa fina o en papel Whatman; por lo que se determina por comparación con otros DNP derivados de aminoácidos, al amino terminal dela proteína. 
OBJETIVOS
Conocer mediante un proceso sencillo la secuencia de aminoácidos que componen a una proteína.
Atreves del método de Sanger identificar el alfa amino terminal de las cadenasde la molécula de hemoglobina.
RESULTADOS
En el primer paso desprotonamos el grupo amino ara que pudiera reacción con EL DNFB aplicando energía cinética durante 45 min. Posteriormente checamos el pHy este fue de 9 lo que indico que se hizo más básica la hemoglobina al agregar el bicarbonato de sodio. Volvimos a protonar los grupos amino combinando el pH con HCl, retiramos el exceso de DNFB queno reaccionó con la hemoglobina con extracciones de éter. Posteriormente se realizó hidrolisis acida donde se formaron enlaces peptídicos con HCl por lo que nos quedaron aminoácidos libre y...