Determinación de carbohidratos en muestras vegetales
Páginas: 3 (683 palabras)
Publicado: 12 de junio de 2013
Determinación de carbohidratos no estructurales.
1.Extracción de carbohidratos.
Se pulveriza la muestra (en nuestro caso eran cepas de Erica, lo más practico fue con una lima, pero dependiendode la muestra se puede hacer de otras maneras)
30 mg de muestra se extraen con 3 ml de agua destilada hirviendo 5 minutos.
Lo más útil es hacerlo en un baño o en un autoclave hirviendo.Introducir un recipiente con agua destilada y las muestras en tubos de ensayo, cuando esté hirviendo añadir 3 ml de agua por muestra y hervir durante 5 minutos. Se pueden tapar los tubos de ensayo con canicaspara evitar evaporación.
Dejar decantar en nevera o centrifugar a velocidad lenta y en frío para. Tomar sobrenadante (sb): separar 2 alícuotas de 0.5 ml (S y A) y guardar el resto (G).
2.Determinación de sacarosa.
A La alícuota S de 0.5 ml añadir 0.5 ml de invertasa: degrada sacarosa en glucosa+ fructosa. Incubar 2 horas a 37ºC
Invertasa de Sigma: I5875. Se prepara stock , 1ml a 1mg/ml con el tampón acetato 0.1N, pH 4.5 (viene con la invertasa o se compra también de Sigma) y se congela a –20º para conservarlo. Cuando se vaya a utilizar se diluye a 0.02mg/ml (0.02ml stock+0.980mlde tampón diluido 1/2).
Poner siempre un control de sacarosa a concentración conocida a 0.5 0 1mg/ml.
Una vez terminada la reacción se procede igual que con la glucosa, para determinar glucosa, ose conserva congelado hasta que se vaya a usar para determinar glucosa.
3. Determinación de almidón
A la alícuota A de 0.5 ml añadir 0.5ml de solución amiloglucosidasa incubar 15 min a 55 ºC.Después someter a la reacción de invertasa y proceder a medir glucosa (o conservar congelado hasta la medida)
Amiloglucosidasa de Sigma A7420. Se prepara a 0.1 mg/ml en tampón acetato 0.1N pH4.5. Separar alícuotas de 1 ml y congelar.
Poner control de almidón a concentración conocida, 0.5 o 1 mg/ml. Normalmente hay que hervir el almidón para que se disuelva.
4. Determinación de...
1.Extracción de carbohidratos.
Se pulveriza la muestra (en nuestro caso eran cepas de Erica, lo más practico fue con una lima, pero dependiendode la muestra se puede hacer de otras maneras)
30 mg de muestra se extraen con 3 ml de agua destilada hirviendo 5 minutos.
Lo más útil es hacerlo en un baño o en un autoclave hirviendo.Introducir un recipiente con agua destilada y las muestras en tubos de ensayo, cuando esté hirviendo añadir 3 ml de agua por muestra y hervir durante 5 minutos. Se pueden tapar los tubos de ensayo con canicaspara evitar evaporación.
Dejar decantar en nevera o centrifugar a velocidad lenta y en frío para. Tomar sobrenadante (sb): separar 2 alícuotas de 0.5 ml (S y A) y guardar el resto (G).
2.Determinación de sacarosa.
A La alícuota S de 0.5 ml añadir 0.5 ml de invertasa: degrada sacarosa en glucosa+ fructosa. Incubar 2 horas a 37ºC
Invertasa de Sigma: I5875. Se prepara stock , 1ml a 1mg/ml con el tampón acetato 0.1N, pH 4.5 (viene con la invertasa o se compra también de Sigma) y se congela a –20º para conservarlo. Cuando se vaya a utilizar se diluye a 0.02mg/ml (0.02ml stock+0.980mlde tampón diluido 1/2).
Poner siempre un control de sacarosa a concentración conocida a 0.5 0 1mg/ml.
Una vez terminada la reacción se procede igual que con la glucosa, para determinar glucosa, ose conserva congelado hasta que se vaya a usar para determinar glucosa.
3. Determinación de almidón
A la alícuota A de 0.5 ml añadir 0.5ml de solución amiloglucosidasa incubar 15 min a 55 ºC.Después someter a la reacción de invertasa y proceder a medir glucosa (o conservar congelado hasta la medida)
Amiloglucosidasa de Sigma A7420. Se prepara a 0.1 mg/ml en tampón acetato 0.1N pH4.5. Separar alícuotas de 1 ml y congelar.
Poner control de almidón a concentración conocida, 0.5 o 1 mg/ml. Normalmente hay que hervir el almidón para que se disuelva.
4. Determinación de...
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