Determinación de km y vmáx

| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
DO (v) | 0’993 | 1’718 | 2’168 | 2’464 | 2’910 |
[S] | 0’15 | 0’3 | 0’45 | 0’6 | 0’9 |
1/[S] | 6’67 | 3’33 | 2’22 | 1’67 | 1’11 |
V | 63’25 | 109’14 | 138’1 | 156’96 |185’1 |
1/V | 1’58 x 10-2 | 9’14 x 10-2 | 7’24 x 10-2 | 6’37 x 10-3 | 5’4 x 10-3 |
PRÁCTICA 5 DE BIOQUÍMICA
I. RESULTADOS OBTENIDOS EN LA PRÁCTICA
Una vez preparado el sustrato (pNPP) sedeterminan sus concentraciones [S] en cada uno de los tubos y su absorbancia (DO) en el fotocolorímetro.
A partir de la DO se calcula la velocidad inicial de la reacción: V=63.7 DO.
Finalmente, secalculan los inversos de la velocidad y la concentración de sustrato.

El objetivo es calcular la Vmáx y la Km. Para ello se emplea el método de Lineweaver-Burk, representando gráficamente 1/[S] enabscisas y 1/v en ordenadas:

A la vista de la gráfica, vemos que 1/vmáx=3.3 x 10-3 y -1/km=-2 aproximadamente. Con estos valores se puede determinar vmáx y km:

* -1/km=-2 km=0.5 mmoles/l* 1/vmáx=3.3 x 10-3 vmáx=303.03 UI/l
II. Resolver los siguientes problemas relacionados con la práctica de enzimología

1) Se estudia la cinética del estado estacionario de unaenzima en ausencia y presencia de un inhibidor (Inhibidor A). La velocidad inicial viene dada en función de la concentración de sustrato en la siguiente tabla.

V UI/I
[S]mM | Sin inhibidor |Inhibidor A |
0.98 | 1.72 | 0.98 |
1.67 | 2.04 | 1.17 |
2.50 | 2.63 | 1.47 |
5.00 | 3.33 | 1.96 |
10.00 | 4.17 | 2.38 |

a) ¿Qué tipo de inhibición (competitiva o no competitiva) seproduce?

Se trata de una inhibición no competitiva. Por mucho que se aumente la concentración de sustrato la velocidad de la reacción en presencia de inhibidor A no alcanza la velocidad de unareacción sin inhibidor.

*En una competitiva, tal y como su nombre indica, el sustrato y el inhibidor compiten por el enzima, por lo que puede llegar un momento en que, aumentando la concentración de...