Determinación de la curva de calibración de una bacteria

Trabajo Práctico de Laboratorio
Tema: Peso seco.

Marco teórico
Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los mismos comienzan a dividirse activamente empleando losnutrientes que le aporta el medio de cultivo para "fabricar" nuevos microorganismos. Este proceso continúa hasta que algún nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante) y el crecimiento sedetiene. También puede detenerse el crecimiento por acumulación de alguna substancia inhibidora formada por los mismos microorganismos, pero supóngase por ahora que éste no es el caso y que laprimera alternativa es la válida. Luego hay dos aspectos claramente diferenciables que hacen al crecimiento microbiano: uno estequiométrico, por el cual la concentración final de microorganismos obtenidosdependerá de la concentración y composición del medio de cultivo, y el otro cinético, el que dirá con qué velocidad se lleva a cabo el proceso.
Procedimiento experimental
El objetivo fue establecerla relación entre la concentración de biomasa y la absorbancia.
Lo primero que se hizo fue colocar los cultivos previamente preparados de los erlenmeyers en frascos de centrífuga; a éstos se losbalanceó en una balanza para poder usarlos en el equipo. Se hicieron dos centrifugaciones, una con un rotor de número 12254, con un máximo de 9000 rpm, por lo que lo operamos a 6000 rpm durante 3 minutos a10°C; la otra, con un rotor número 12166, con 10000 rpm máximas, a la cual operamos a 7000 rpm durante 2 minutos a 9°C. Entre ambas centrifugaciones tiramos el líquido sobrenadante, diluíamos ybalanceábamos nuevamente para efectuar una nueva operación.
Una vez hechas las centrifugaciones, se diluyó con 15 ml de agua en el tubo de la centrifuga. Se usaron 5 ml en un tubo de ensayo que servirápara hacer las diluciones necesarias para la determinación de la absorbancia; los 10 ml restantes se usan en 2 pesafiltros, en porciones de 5 ml cada uno.

Se pesaron los pesafiltros vacíos con...