Determinación de Lipoproteínas

Determinación de colesterol y lipoproteínas plasmáticas

Introducción

La grasa que se absorbe a partir de la dieta y los lípidos sintetizados por el hígado y el tejido adiposo deben transportarse entre los diversos tejidos y órganos para utilización y almacenamiento (Harper, 2009); los lípidos en el plasma se distribuyen de la siguiente manera: triacilgliceroles (16%), fosfolípidos (30%),colesterol (14%) y colesterol esteres (36%) y ácidos grasos de cadena larga no esterificados (4%). Las alteraciones de las lipoproteínas plasmáticas y trastornos del metabolismo de los lípidos se encuentran entre los factores de riesgo de ateroesclerosis más firmemente establecidos y mejor conocidos (Harrison, 2008). Al ser el colesterol y los triacilglicéridos (TAG), constituyentes principales delas lipoproteínas plasmáticas, su determinación es necesaria para el cálculo del riesgo cardiovascular. A medida que aumenta el nivel de colesterol en sangre, aumenta el riesgo de cardiopatía coronaria (Institut d´ Estudis de la Salut, 2006). La determinación de colesterol y lipoproteínas plasmáticas puede verse alterada por la edad, sexo, alimentación y herencia.

Partiendo del hecho de quelas concentraciones plasmáticas de TAG y colesterol total son factores de riesgo para enfermedades cardiovasculares y de que éstos forman parte estructural de las lipoproteínas; en este estudio determinaremos las concentraciones de colesterol total y triacilgliceroles por medio de electroforesis y el uso de enzimas específicas para colesterol y TAG. Y después utilizaremos estos resultados paracalcular mediante aritmética por la proporción de TAG en lipoproteínas VLDL y colesterol total en comparación con colesterol HDL y LDL. Después se estimará el índice aterogénico comparando los datos obtenidos por la electroforesis y las fórmulas.

Material y Métodos

Sujetos. Se utilizó el plasma de 2 sujetos que tuvieron ayuno previo de 12 horas mínimo. Ninguno refirió la ingesta de fármacos o elpadecimiento de enfermedades que puedan afectar los resultados del estudio.





Técnicas y métodos.
Se prepararon siete tubos:
1. ESTÁNDAR DE COLESTEROL. 10 μl de estándar de colesterol (200 mg/dL). Se agregó 1 ml de enzimas para colesterol, después de mezclarse se dejó incubar a temperatura ambiente por 10 min.
2. PLASMA (Sujeto 1). 10 μl de plasma. Se agregó 1 ml de enzimas paracolesterol, después de mezclarse se dejó incubar a temperatura ambiente por 10 min.
3. SOBRENADANTE CON COLESTEROL HDL. 50 μl ml de plasma agregados a 20 μl de solución precipitante de VLDL y LDL, centrifugado por 10 minutos a 300 rpm. Se agregó 1 ml de enzimas para colesterol, después de mezclarse se dejó incubar a temperatura ambiente por 10 min.
4. PLASMA (Sujeto 2). 10 μl de plasma. Se agregó 1 mlde enzimas para TAG, después de mezclarse se dejó incubar a temperatura ambiente por 10 min.
5. ESTÁNDAR DE TAG. 10 μl de estándar de TAG (200 mg/dL). Se agregó 1 ml de enzimas para TAG, después de mezclarse se dejó incubar a temperatura ambiente por 10 min.
6. PLASMA (Sujeto 1). 10 μl de plasma Se agregó 1 ml de enzimas para TAG, después de mezclarse se dejó incubar a temperatura ambiente por10 min.
7. PLASMA (Sujeto 2). 10 μl de plasma. Se agregó 1 ml de enzimas para TAG, después de mezclarse se dejó incubar a temperatura ambiente por 10 min.
Se leyó la absorbancia (A) en el espectrofotómetro a 520 nm, calibrado a cero con el blanco, transcurridos los 10 minutos de incubación.

Materiales.
Gradilla con 6 tubos de ensayo.
Pipetas de 5 y 10 ml.
Pipetas automáticas
Puntas parapipetas automáticas
Solución de enzimas para colesterol: amortiguador Tris 100 mmol/l, pH 7.7; MgCl2 50 mmol/l, 4-amino-antipirina 1 mmol/l, fenol 6 mmol/l; colesterol esterasa ≥_160 U/l, colesterol oxidasa ≥ 100 U/l y peroxidasa ≥ 2 000 U/l.
Patrón de colesterol de 200 mg/dl (5.17 mmol/l) –para colesterol total.
Solución de enzimas para TAG: amortiguador Tris 100 mmol/l, pH 6.7, ATP 0.7...