Determinación de proteínas

BIOQUÍMICA Y FARMACIA
BIOQUÍMICA I

PRÁCTICA:
Identificación de las proteínas

Objetivo:
o Reconocer proteínas mediante sus propiedades
o Identificar el tipo de aminoácidos presentes en una proteína
o Comprobar la actividad enzimática de ciertas proteínas
INTRODUCCIÓN:
Las proteínas son una clase de biopolímeros que desempeñan una enorme variedad de funciones: unas transportan,otras almacenan moléculas pequeñas, otras más constituyen gran parte de la organización estructural de las células y los tejidos. Quizás las más importantes de todas las proteínas sean las enzimas que son los catalizadores que promueven la enorme variedad de reacciones que forman el metabolismo. Cada tipo de célula en todos los organismos posee varios miles de clases de proteínas para cumplir la granvariedad de funciones.

Para mantener la multiplicidad de sus funciones, las proteínas son moléculas extremadamente complejas que tienen una estructura determinada formada por la secuencia definida de unidades de estructura química comunes a todas las proteínas y que son los aminoácidos. Las proteínas tienen una estructura tridimensional específica dada por plegamientos de su cadena, dichaestructura debe mantenerse para que la proteína ejerza su función, esto implica que existan interacciones entre los aminoácidos que conforman las proteínas y las moléculas del medio (agua fundamentalmente), adquiriendo una conformación natural de máxima estabilidad la cuál no debe perderse.
La desnaturalización de las proteínas implica modificaciones en la estructura de la proteína que traen comoresultado una alteración o desaparición de sus funciones.
Este fenómeno puede producirse por una diversidad de factores, ya sean físicos cómo: el calor, las radiaciones ultravioleta, las altas presiones; o químicos cómo: ácidos, bases, sustancias con actividad detergente.
Este fenómeno genera la ruptura de los enlaces disulfuro y los puentes de hidrígeno, generando la exposición de estos.Cuando la proteína es desnaturalizada pierde sus funciones cómo: viscocidad, velocidad de difusión y la facilidad con que se cristalizan.
La reversibilidad de la desnaturalización, depende que tan fuertes sean los agentes que desnaturalizaron la proteína. Todo depende del grado de ruptura generado en los enlaces.

MÉTODOS
COAGULACIÓN DE LAS PROTEÍNAS

Las proteínas, debido al gran tamaño de susmoléculas, forman con el agua soluciones coloidales. Las proteínas tienen una forma natural y especial de acomodarse, enrollarse sobre sí mismas (estructura secundaria y terciaria) y de agruparse entre sí (estructura cuaternaria). Al ser sometidas al calor alteras su orden, en algunos casos es permanente (Desnaturalización).

Cuando la proteína toma su conformación natural los elementoshidrofóbicos de las proteínas quedan dentro del plegamiento, y los hidrofílicos en el exterior. Generalmente cuando se desnaturaliza deja de ser soluble en agua y precipita.
TÉCNICA
Para ver la coagulación de las proteínas se puede utilizar leche, para conseguir más volumen puede prepararse para toda la clase una dilución de clara de huevo en agua, de forma que quede una mezcla aún espesa.REACCIONES COLOREADAS
Reacciones De Xantoproteína
Es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali vira a uncolor anaranjado oscuro.

TÉCNICA
Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de solución problema (leche).
Añadir 1 cc. de HNO3 concentrado.
Calentar al baño maría a 100: C.
Enfriar en agua fría
Añadir gota a gota una disolución de sosa al 40%.
REACCIÓN DE BIUTER
La producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (- CO-...