Determinación del grupo amino terminal de la hemoglobina

PRACTICA NO.1
DETERMINACION DEL GRUPO AMINO TERMINAL DE LA HEMOGLOBINA

* INTRODUCCION:
Para analizar la estructura primaria de una proteína se utilizan diversos procedimientos. Se dispone dediversos protocolos para marcar e identificar el residuo amino-terminal. Sanger introdujo el reactivo 1-fluoro,2-4-dinitrobenceno (DNFB) con este fin; otros reactivos utilizados para marcar elresiduo amino-terminal, el cloruro de dansilo y el cloruro de dabsilio, dan derivados dinitrofenilados.
Una vez que se ha marcado el residuo amino-terminal con uno de estos reactivos, se hidroliza elpolipéptido a sus aminoácidos constituyentes y se identifica el aminoácido marcado. Dado que la étapa de hidrólisis destruye el polipéptido, este procedimiento no puede utilizarse para secuenciar unpolipeptido más allá de su residuo amino-terminal. Sin embargo puede ayudar a determinar el número de polipéptidos químicamente diferentes en una proteína, siempre que cada uno tenga un residuoamino-terminal diferente. Por ejemplo, si la insulina se somete a este procedimiento se marcarían dos residuos. Phe y Gly.
* OBJETIVO:
Utilizando el método de Sanger identificar el grupo amino-terminal de lahemoglobina.
* RESULTADOS:
MUESTRA | Rf |
VALINA | 0.7952 |
ALANINA | 0.7120 |
GLUTAMINA | 0.8414 |
ASPARAGINA | 0.8849 |
FENILALANINA | 0.7095 |
DNFB | 0.5176 |
PROBLEMA | 0.5076|

* DISCUSION:
La hemoglobina en presencia de bicarbonato de sodio hace que sus grupos amino se desprotonen y esto facilita la entrada del DNFB al polipéptido en un medio alcalino. Lahidrólisis permite que se rompa la cadena de polipéptidos pero el grupo amino y el dinitrofenilo permanecen estables, obteniendo en el hidrolizado aminoácidos libres y dinitrofenil derivados, estos se puedenextraer con éter por quedar sin carga, y los pudimos identificar en el cromatograma en el cual observamos en nuestra muestra problema dos manchas y al comparar los datos de los Rf tanto de la...