Determinación del umbral de detección de Pseudococcus viburni (Hemiptera: Pseudococcidae) por PCR

ISSN 0373-5680 (impresa), ISSN 1851-7471 (en línea) Rev. Soc. Entomol. Argent. 71 (1-2): 151-154, 2012

NOTA CIENTÍFICA

Determinación del umbral de detección de
Pseudococcus viburni (Hemiptera: Pseudococcidae) por
PCR
VERA, Diana, Silvina GARRIDO, Elizabet AUN, Jonatan LAGO y
Liliana CICHON
INTA EEA Alto Valle. Contralmirante Guerrico Ruta Nac. Nº 22 Km. 1.190. Provincia de Río
Negro;e-mail: dianavera@correo.inta.gov.ar

Determination of the detection threshold of Pseudococcus viburni
(Hemiptera: Pseudococcidae) by PCR

ABSTRACT. The obscure mealybug Pseudococcus viburni (Signoret)
is a quarantine pest present in the Upper Valley of Río Negro and Neuquén,
Argentina. The detection of any growth stage of the mealybug in quarantine
inspections often results in rejectionsof fresh fruit in countries where the
fruit is exported. In this study the detection threshold of P. viburni was
determined by PCR technique. The DNA extraction kit, DNAzolTM, was used
as a fast DNA extraction method. By using the above extraction kit, good
DNA quality and concentration was obtained from specimens of P. viburni
of different developmental stages (including eggs, nymphs andadults) which
were preserved in pro-analysis ethanol at -20ºC following the manufacturer
protocol. One aliquote of this DNA was used as a template in a PCR reaction
using specific P. viburni primers recorded in the literature and DNA of P.
viburni from an entomological collection was used as a control. In all stages
the amplification generated an expected size band of 650 bp visualized in anagarose 1.5% gel. The detection threshold of P. viburni using our method was
an egg. These results involve a specific detection technique for P. viburni and
reliable species identification in a space of 48 h.
KEY WORDS. Mealybug of the fruit. Quarantine inspection. Quarantine pest.
Threshold PCR.

RESUMEN. La cochinilla harinosa de los frutales Pseudococcus
viburni (Signoret) es una plagacuarentenaria, presente en el Alto Valle de
Río Negro y Neuquén, Argentina. Su detección durante la fiscalización
aduanera, aun en los estados inmaduros, provoca rechazos de la fruta
fresca argentina con destino a los mercados internacionales. Las técnicas
actuales de identificación de pseudocóccidos y otros cocoideos implican la
realización de preparados microscópicos que requieren variosdías. Por esto,
la disminución de los tiempos de identificación es importante sobre todo en
las tareas de fiscalización. En este trabajo, se determinó el umbral de detección
específica de P. viburni mediante PCR, como así también, la implementación
de un método rápido de extracción de ADN mediante DNAzol™. Insectos
de diferentes estados de desarrollo (huevo, ninfas (tres estados ninfales) yadulto), conservados en etanol pro análisis a -20 ºC, provenientes de montes
Recibido: 16-VIII-2011; aceptado: 10-XI-2011

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frutales del Alto Valle, Argentina, fueron procesados según el protocolo
del fabricante y se logró obtener ADN de buena calidad y concentración.
Una alícuota del mismo fue utilizado como templado para unareacción de
PCR usando primers específicos para P. viburni, registrados en bibliografía
y como control positivo ADN de P. viburni de colección entomológica. Los
primers utilizados y sus secuencias son A4 (5’-cccgcggccgttctctcttt-3’) y A5
(5’-atatgttgtgcatagttgtgtgtgcgc-3’), diseñados por Beuning et al. (1999). La
amplificación generó una banda de peso molecular esperado de 650 pb.
en gel deagarosa al 1.5% en todos los estadios, se determinó como límite
de detección el estado de huevo. Esta técnica constituye una detección
específica de P. viburni en un lapso máximo de 48 h.
PALABRAS CLAVE. Cochinilla harinosa de los frutales. Control aduanero.
Plaga cuarentenaria. Umbral de detección PCR.
Algunas especies de la Superfamilia
Coccoidea son plagas destructivas de cultivos
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