Determinación enzimática e inhibición de chocho y uvilla

UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS - ESPE
INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
ENZIMOLOGÍA
Integrantes: Achig Mishell - Oviedo Alejandra - David Valencia
Fecha de entrega: 13-06-2014

NRC: 3268

INFORME DE LABORATORIO
PRÁCTICA N° 3
1. TEMA: Determinación de la actividad enzimática y acción inhibitoria de extractos de Lupinus
mutabilis (Chocho) y Physalis peruviana (uvilla) sobre la alfa amilasa2. OBJETIVOS:
2.1. Objetivo General:
Determinar la actividad enzimática y acción inhibitoria de extractos de Lupinus
mutabilis (Chocho) y Physalis peruviana (uvilla) sobre la alfa amilasa
2.2. Objetivos Específicos:
Calcular los parámetros cinéticos (Vmax y Km) de las reacciones catalizadas por la alfa
amilasa
Identificar el tipo de inhibición presente en la reacción con extractos deLupinus mutabilis
(Chocho) y Physalis peruviana (uvilla) sobre la alfa amilasa
3. MARCO TEÓRICO
Los enzimas son biomolecular especializadas en la catálisis de las reacciones químicas que
tienen lugar en la célula. Son muy eficaces como catalizadores ya que son capaces de aumentar la
velocidad de las reacciones químicas mucho más que cualquier catalizador artificial conocido, y
además sonaltamente específicos ya que cada uno de ellos induce la transformación de un sólo
tipo de sustancia y no de otras que se puedan encontrar en el medio de reacción (Gómez, 2003).
La actividad catalítica de una enzima se determina midiendo la velocidad inicial de reacción que es
la pendiente de la curva de progreso (curva de producto formado o sustrato t La inhibición
enzimática consiste en ladisminución o anulación de la velocidad de la reacción catalizada por una
enzima.
La actividad de una enzima puede ser disminuida o eliminada completamente por la acción
de ciertas sustancias a las cuales se las conoce con el nombre genérico de inhibidores enzimáticos.
Debemos aclarar que no deben ser incluidos en este grupo de sustancias, aquellos agentes que
producen simplemente una destrucciónirreversible de la enzima, como podrían ser todos aquellos
que conducen a su desnaturalización, como por ejemplo los ácidos fuertes (Bradut, 2008).

La inhibición enzimática es de gran importancia fisiológica, ya que a veces la inhibición de
una sola enzima que forma parte de una cadena de reacciones metabólicas puede inhibir por
completo a todo el proceso metabólico involucrado y ejercer enesa forma un efecto profundo y a
veces fatal sobre el organismo (Bradut,2008).
4. RESULTADOS PRIMARIOS
Tabla 1. Absorbancias obtenidas al medir con el espectrofotómetro las concentraciones de almidón
0,2; 0,5; 1; 1,5 y 2 g/ml

Concentración de
almidón en porcentaje
(%)
Blanco
0,1
0,25
0,5
0,75
1

Concentración de
almidón (g/ml)

Absorbancia
(λ=540nm)

0
0,2
0,5
1
1,5
20
0,155
0,162
0,18
0,217
0,23

Curva de calibración almidón
ABSORBANCIA (Λ=540NM)

0,3
0,25
0,2
y = 0,0855x + 0,0832
R² = 0,6497

0,15
0,1
0,05
0
0

0,5

1

1,5

2

2,5

/ml

Fig. 2. Curva de calibración para el almidón. Gráfico y ajuste realizado en Microsoft Excel. Valor del
coeficiente de extinción molar=m=OD= 0.0855

4.1. Marcha de los trabajos
Tabla 2.Absorbancias obtenidas a partir de las distintas concentraciones de almidón en porcentaje en el tiempo con la
acción de la enzima y sin inhibidor.

Concentración inicial de
almidón en porcentaje
(%)

Absorbancia (nm) después de la acción de la enzima
5 min
0
0,149
0,151
0,164
0,212
0,224

Blanco
0,1
0,25
0,5
0,75
1

10 min
0
0,141
0,148
0,160
0,193
0,209

15 min
00,108
0,124
0,131
0,133
0,154

Tabla 3. Absorbancias obtenidas a partir de las distintas concentraciones de almidón en porcentaje en el tiempo con la
acción de la enzima e interferencia del inhibidor de extracto de uvilla al 25%.

Concentración inicial
de almidón en
porcentaje (%)

Absorbancia (nm) después de la acción de la enzima e inhibidor
al 25%
5 min
0,152
0,1565
0,172...