DETERMINACI N DE PROTE NAS POR EL M TODO DE BIURET

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BIURET
Reacción de biuret
El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por la condensación de dos moléculas de urea con eliminación deamoniaco





Si un solución fuertemente alcalina de sulfato cúprico se añade una solución de proteínas se forma un complejo entre el ion cúprico y los enlaces peptídicos, con aparición de unacoloración violeta-purpura, que presenta un máximo de absorción a 540nm
Características de la reacción
-La reacción biuret se aplica a partir de los tetra péptidos, a todos los péptidos y proteínas
-Surango de determinación es de 1 a 6mg/ml
-No depende de la composición de aminoácidos



Complejo
El complejo se basa en la desprotonacion de los grupos amida para formar el enlace con el cobre o por elestablecimiento de un enlace coordinado entre el metal y los pares de electrones libres de los átomos de oxígeno y nitrógeno del péptido.

Interferencias
Existen pocas interferencias en estadeterminación entre las que se encuentra la presencia del ion amonio el cual altera el desarrollo del color, algunos pigmentos absorben a la misma longitud de onda y algunos carbohidratos y lípidos soncapaces de formar complejos con el ion coordinado
ventajas
-Bastante específico para proteínas
-Muestra pocas interferencias
-es barato
Desventajas
-Poca sensibilidad
-Rango de sensibilidad 1000-10000-Coeficiente de extinción o cálculo de la concentración: 545= 0.06ml/mg cm













METODO
1. el espectrofotómetro que se va a manejar en la práctica es del tipo convencional de haz simple. Un esquemadel mismo se encuentra a continuación


-Se enciende el espectrofotómetro y se ajusta la longitud de onda a 540nm
-Se coloca en una gradilla ocho tubos de ensayo que deben estar limpios y secos
-Seenumera del 1 al 8 los tubos







Con las micro pipetas adecuadas al volumen a medir, se adiciona a cada uno de ellos los volúmenes de la disolución patrón de albumina de suero bobino y de agua...