Determinacion alcalinidad total y compuesta

PRÁCTICAS 17 Y 18:
PREPARACIÓN DE
MEDIOS DE CULTIVO.
TÉCNICAS DE SIEMBRA.


1) OBJETIVOS:

Aprender a realizar medios de cultivo (líquido, semisólido y sólido) para placas y tubos.
Posterior siembra de dichos medios mediante las diferentes técnicas.

2) FUNDAMENTOS:

A) Medios de cultivo:
Son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y condiciones físicas
óptimas(temperatura, humedad, ph, presencia de oxígeno…), permiten el crecimiento
de microorganismos. Los ingredientes más importantes son: agua, bases nutritivas
(peptonas, extractos, infusiones…), carbohidratos (azúcares), sales minerales (P, S,
Fe,…), factores de crecimiento y colorantes o indicadores entre otros.
Los tipos de medio de cultivo atendiendo proporción en agar, es decir, suconsistencia
o estado físico:
· Medio sólido: La proporción de agar* siempre estará por encima del 12%. Antes se
usaba gelatina, que funde a 24 ᵒC y existen muchas bacterias gelatinasa, que destruyen
la gelatina. Los medios sólidos nos permiten siembra en tubo o placa, y son muy
importantes para el aislamiento, purificación y visionado de colonias, así como su
identificación.
*Agar: es una gelatinavegetal de origen marino, un polisacárido obtenido de la
pared celular de varias especies de algas. Químicamente es un polímero de
subunidades de galactosa (azúcar simple). Algunos de sus principales usos son
para medios de cultivo, laxante, helados, espesante para sopas…

· Medios líquidos: Son también llamados caldos, y no contienen agar en su
composición. El más utilizado es el caldonutritivo, compuesto principalmente
por extracto de carne, peptona y agua. Permiten la siembra en tubos, y son
muy útiles para identificación de bacterias, recuentos bacteriológicos por
turbidimetría, realización de inóculos o para la obtención de productos
bacterianos.

· Medios semisólidos: Se sitúan entre los líquidos y los sólidos, y su proporción
en agar suele ser inferior al 5% (2,5 –4%), pero necesitan una pequeña
cantidad para presentar algo de consistencia. Son útiles para pruebas como la
de oxidación-fermentación en levaduras o pruebas de movilidad en bacterias.

B) Técnicas de siembra:

Se trata del paso de una muestra microbiana a un medio de cultivo. Si este paso
se realiza de un medio de cultivo a otro, se denomina resiembra. Toda siembra
puede realizarse demaneras diferentes según las características de la muestra,
del medio o el material utilizado. Los más destacados son los siguientes:

· Siembra en medio líquido: Si la siembra se realiza con asa de siembra, esta
debe cargarse con la muestra sólida (sin excesos), o líquida en condiciones de
esterilidad, y se añade al medio líquido agitándola. Si se realiza con un hisopo,
el procedimiento es elmismo.
Si realizamos la siembra con pipeta, tomamos un volumen determinado de
muestra y lo vertemos en el medio, agitando para su homogeneización.

· Siembra en medio sólido:

a) En placa:
* Por agotamiento o aislamiento en estrías: Se toma con el asa de siembra
esterilizada una pequeña cantidad de muestra, depositando el inóculo en un
borde superior de la plaza, a partir de ahí, secomienzan a realizar movimientos

en zig-zag hacia el otro extremo, sin levantar el asa de la placa ni coger más
muestra.
* En estría múltiple(la más utilizada): con una imagen se ve claramente:

Sólo cogemos muestra para la primera estría, para el resto cogemos de uno de
los extremos de la estría anterior, a fin de aislar las posibles colonias. Antes de
cada extensión es necesario esterilizar(flamear) el asa.
* Cuatro cuadrantes: Para esta técnica debemos de dividir la placa en 4 cuadrantes,
trazando dos diámetros perpendiculares en la misma. El método de extensión es igual
que en estría múltiple.
b) En tubo:
* Por estría: Este tipo de siembra se realiza en tubos con medio sólido inclinado. Se
debe tomar, con el asa de siembra esterilizada, la muestra. A continuación, desde el...