Determinacion Clorofila En Aguas

DETERMINACION DE CLOROFILA

La evaluación de la concentración de clorofila en un volumen determinado de agua puede utilizarse como indicador de la biomasa algal en el mismo.
La clorofila essoluble en solventes orgánicos tales como éter, acetona, metanol, cloroformo y piridina. Suelen utilizarse acetona o metanol para su extracción, ya que rompen los puentes entre el pigmento y las proteínas ysolubilizan las clorofilas.
En la determinación espectrofotométrica de las clorofilas a, b, c, etc se miden las absorbancias a diferentes longitudes de onda.
- 750 nm: turbidez de la muestra
-664 nm: clorofila a
- 647 nm: clorofila b
- 630 nm: clorofila c
- 430 nm: carotenoides para el cálculo del Indice de Margalef
El HCl se utiliza para degradar la clorofila y medir la absorbancia delos feopigmentos. Deben conocerse los coeficientes de absorción específica k
k = D/(d.C) D= densidad óptica d= long. En cm del recorrido de la luz de la celdaC= conc. De pigmentos(g/l)
Marcha de extracción:
La extracción de la clorofila debe realizarse en oscuridad y a baja temperatura para reducir al mínimo la fotooxidación.
Se procede de lasiguiente manera:
1- Se filtra un volumen conocido de muestra a través de un filtro de fibra de vidrio (Whatman GF/F o similar). Si la muestra tiene mucho polvillo, dejar decantar un día el aguadentro del recipiente antes de filtrar.
2- Se colocan los filtros cortados en un tubo envuelto con papel de aluminio y se agrega un volumen conocido de solvente: metanol…. Hasta 8 ml. Aunque serecomienda utilizar un volumen menor cuando la concentración de clorofila es baja, para no diluir demasiado.
3- Se deja en reposo en oscuridad y en heladera durante una noche para favorecer laextracción de pigmentos.
4- Centrifugar. Quedarse con el sobrenadante. Si está muy turbio volver a centrifugar y luego leer absorbancia a 750 nm y 665 nm. Utilizar como blanco metanol.
5- En la...