Determinacion cuantitativa de carbohidratos

PRACTICA 1. DETERMINACION CUANTITATIVA DE CARBOHIDRATOS

I. GENERALIDADES SOBRE LA LEY DE BOUGUER-LAMBERT-BEER.
Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática (de longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en solución:
A = log I/Io = a·b·c
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración c –a mayor número de moléculas mayorinteracción de la luz con ellas- y a la distancia b que recorre la luz por la solución –a igual concentración, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará-; y por último de a una constante de proporcionalidad que dependerá de las unidades de b y c.
A menudo el paso óptico b está dado en cm y la concentración con moles por litro y la longitud de la celda encentímetros, entonces el coeficiente de extinción o absortividad molar, tiene unidades de M/cm y es específica de cada cromóforo. La segunda magnitud (l) se expresa siempre en cm mientras que la primera (c) se hace, siempre que sea posible, en M, con lo que las dimensiones de ε resultan ser M-1·cm-1
Cuando, por desconocerse el peso molecular del soluto, la concentración de la disolución seexpresa en otras unidades distintas de M, por ejemplo g·L-1, las dimensiones de ε resultan ser distintas, por ejemplo g-1·L·cm-1, y al coeficiente así expresado se denomina coeficiente de extinción específico (εs).
La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de c altos, ε varía con la concentración, debido a fenómenos de dispersión de la luz, agregación demoléculas, cambios del medio, etc.
II. MÉTODOS CUANTITATIVOS PARA LA DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES
Método 1 Procedimiento Específico de Azúcar Reductores. Neiker tecnalia.
Principio y método. Se trata de determinar el contenido de azucares reductores, estableciendo como máximo permitido un porcentaje de azucares reductores del 0.1-0.2%. Dicho contenido se calcula utilizando la fórmula 1.El método a seguir es el siguiente:
• Se prepara disolución de ácido dinitrosalicilico, diluyendo 4.8 g de NaOH en 60 ml de agua destilada. A esta disolución se le añaden 3 g de ácido dinitrosalicilico y 150 ml de agua destilada. Se diluye totalmente y se añaden 90 g de Sal de Rochelle, enrasando a un volumen total de 300 mL.
• Posteriormente, se recogen 3 o 4 patatas por variedad y semachacan con un picador.
• Se cogen 0,3 g de la patata picada diluyéndolos en 1 ml de agua destilada en un tubo de ensayo.
• Posteriormente se adicionan en el tubo 2 ml de la disolución de ácido dinitrosalicilico preparada anteriormente. Se prepara también, el blanco para el espectrofotómetro en un tubo 1 ml de agua destilada y 2ml de ácido dinitrosalicilico.
• Se meten las muestras y elblanco al baño maría durante 5 minutos.
• Posteriormente se meten a un baño de agua fría durante 2 minutos agitando y 10 minutos más dejando reposar.
• Se diluyen las muestras y el blanco cogiendo 1ml y diluyendo en 5 ml de agua destilada.
• Se introduce en el espectrofotómetro el blanco y se mide a la longitud de onda de 546 nm. Por último, se procede a la medida de las muestras a la mismalongitud de onda.
Para el cálculo del contenido total de azucares reductores, se aplica la relación existente entre la absorbancia y el porcentaje en azúcares:
% Azúcares = (Absorbancia − .0 00385) x .1 07893 (Fórmula 1)
Método 2. Determinación cuantitativa de azúcares reductores y totales (método de
Lane y Eynon).
Existen diversos métodos de cuantificación de carbohidratos basados en lacapacidad reductora de los azúcares que tienen libre el grupo carbonilo.
Estos carbohidratos son capaces de reducir elementos como el cobre (Cu+2), el hierro (Fe+3) o el yodo (I0).
En el caso específico del cobre, este es reducido desde Cu+2 a Cu+1. En este sentido, en el método de Lane y Eynon (1923) se hace reaccionar sulfato cúprico con azúcar reductor en medio alcalino, formándose...