Determinacion Cuantitativa De Urea

UREA-UV

Urea
Ureasa -GLDH. Cinético UV
Determinación cuantitativa de urea IVD
Conservar a 2-8ºC
PRINCIPIO DEL METODO La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en amoníaco (NH3) y anhídrido carbónico (CO2). El amoníaco formado se incorporan al α-cetoglutarato por acción de la glutamato deshidrogenasa (GLDH) con oxidación paralela de NADH a NAD+ : Urea + H2O + 2 H⎯⎯⎯ ⎯→ 2 NH3 + CO2
+

4. 5.

Mezclar y leer las absorbancias a los 30 s (A1) y a los 90 s (A2). Calcular: ∆A= A1 – A2.

CALCULOS ( ∆A ) Muestra x 50 (Conc. Patrón) = mg/dL de urea en la muestra ( ∆A ) Patrón
10 mg/L urea BUN dividido por 0,466 = 21 mg/L de urea = 0,36 mmol/L urea1.

Factor de conversión: mg/dL x 0,1665 = mmol/L. CONTROL DE CALIDAD Es conveniente analizar junto con lasmuestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias. VALORES DE REFERENCIA Suero: de 15 a45 mg/dL (2.49-7.49 mmol/L) Orina: de 20 a 35 gr/24 horas Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. CARACTERISTICAS DEL METODO Rango de medida: Desde el limite de detección de 1,82 mg/dL hasta el limite de linealidad de 500 mg/dL. Si la concentración es superior al limite de linealidad, diluir la muestra 1/2 con ClNa 9 g/L ymultiplicar el resultado final por 2. Precisión:
1

Ureasa GLDH

2 NH3 + α-Cetoglutarato + NADH ⎯⎯⎯ → H2O + NAD + L-Glutamato ⎯ La disminución de la concentración de NAD+ en el medio es proporcional a la concentración de urea de la muestra ensayada1.
+

SIGNIFICADO CLINICO La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas; se forma en el hígado a partir de su destrucción. Puedeaparecer la urea elevada en sangre (uremia) en dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales, insuficiencia cardiaca, hemorragias gástricas, hipovolemia y obstrucciones renales 1,4,5. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

REACTIVOS TRIS pH 7,8 80 mmol/L R1 6 mmol/L Tampón α-Cetoglutarato Ureasa 3750 U/L R2 Glutamatodeshidrogenasa (GLDH) 6000 U/L Enzimas NADH 0,32 mmol/L UREA CAL Patrón primario acuoso de Urea 50 mg/dL PREPARACION Reactivo de trabajo (RT): Disolver ( → ) el contenido de un vial de R 2 Enzimas en un frasco de R 1 Tampón. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Estabilidad: 6 semanas a 2-8ºC o 7 días a 15-25ºC.
CONSERVACION Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables,hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. UREA CAL Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia departículas y turbidez. - Absorbancia (A) del Blanco a 340 nm < 1,00.

Media (mg/dL) SD CV (%)

Intraserie (n=20) 41,9 146 0,89 2,55 2,13 1,74

Interserie (n=20) 39,96 144 1,10 2,79 2,76 1,93

Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,0016 A. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x). Losresultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes: Coeficiente de correlación (r): 0,99. Ecuación de la recta de regresión: y= 0,99x + 0,01. Las características del método pueden variar según el analizador utilizado. INTERFERENCIAS Como anticoagulante se recomienda la heparina. En ningún caso deben 1 utilizarse sales de amonio o fluoruro . Se han descrito varias drogas y otras substancias...