Determinacion De Acido Piruvico

PROCESO EXPERIMENTAL:
OBJETIVO: Determinar de forma cualitativa y cuantitativa la presencia de Ácido Pirúvico en sangre.
1º Extraer sangre venosa, en ayunas (3horas). El proceso debe realizarse lo antes posible para evitar la GLICOLISIS.
Ácido láctico
El ↑ [lactato] es un indicador de metabolismo anaeróbico
El ácido láctico esun ácido fuerte (pKa= 3,9) Cuando se acumula puede provocar una importante disfunción celular, orgánica y global del sistema.




2º Echar en un tubo de centrifuga 1ml de sangre venosa que contenga 9 ml de solución de ácido tricloroacètico (utilizado en bioquímica por su propiedad de precipitar macromoléculas,como proteínas, ácido desoxirribonucleico y ácido ribonucleico)
Mezclar por agitación y centrifugar a 3000r.p.m por 15 min.


Disponer de tres tubos de ensayo:
a) Problema
3 ml desobrenadante desproteinizado
3 ml de Ácido sulfúrico 0,1N
0,5 ml de Reactivo de 2,4 DFH

b) Blanco
3 ml Acido tricloroacètico al 5%
3 ml de Ácido sulfúrico 0,1N
0,5 ml deReactivo de 2,4 DFH

c) Patrón
1,5ml de Solución patrón de Acido pirúvico
Agua destilada
3 ml de Ácido sulfúrico 0,1N
0,5 ml de Reactivo de 2,4 DFH

Mezclar poragitación y reposar en la oscuridad por 15 min
Este procedimiento, se puede apreciar la formación de hidracina durante el reposo en oscuridad de la solución, lo cualpropicia un ambiente que favorece la producción de la misma.


Posteriormente agregamos la solución de hidróxido de sodio al 8%

Esto es para propiciar el medio alcalino,para lo cual se apreciara un color PARDO ROJIZO que evidenciara la correspondiente formación de la hidracina



Al final leer en espectrofotómetro a 540nm.