Determinacion de acido urico

UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

FACULTAD DE MEDICINA

DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA

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MATERIA: BIOQUIMICA II

PRACTICA No 4
“DETERMINACION DE ACIDO URICO POR EL METODO PAP”
Analisis enzimático colorimétrico por acido urico con factor aclarante de Lipidos LCF

Alumna:
Karla Noemí Cáceres Arteaga

Grupo:
A

Subgrupo:
05

Numero de lista:36

Mesa:
7

DocenteCiudad universitaria 5 de Octubre de2010

OBJETIVOS

1. Aplicar la técnica de la determinación de acido úrico por el método PAP.

2. Comprobar la existencia de acido úrico en suero.

3. Comprobar la interrelación de las ciencias , a través de técnicas espectrofotométricas en Bioquímica.

PARTE EXPERIMENTAL

Determinacion del acido urico por reacción de la uricasa.

Elperoxido de Hidrogeno formado reacciona por la acción catalítica de la peroxidasa con acido 3,5-dicloro-2-hidroxybenzensulfonico (DCHBS) y 4-aminofenazona (PAP) para producir un complejo rojo violeta de quinoneimina como indicador.

PRINCIPIOS DE LA REACCION

Acido urico + O2 + 2H2O -------- Uricasa------------ Alantoina + CO2 + H2O2

2H2O2 + DCHBS + PAP -----------Peroxidasa-----------Quinoneimina + HCl+ 4H2

Reactivos de laboratorio
• Reactivo enzimático RGT
• Buffer Fosfato pH = 7.0
• 4-aminofenazona
• DCHBS
• Uricasa
• Peroxidasa

• Estándar de acido urico

• MUESTRA: Suero

Plasma heparinizado con EDTA

Orina

Nota: Las muestras lipemicasgeneralmente generan turbidez en la mezcla del reactivo con la muestra, lo que lleva a resultados elevados falsos.
Esta prueba evita resultados falsos a través del factor aclarante de lípidos (LCF).
El LCF aclara completamente la turbidez causada por muestras lipemicas.

(Mediran los reactivo directamente del frasco que lo contiene)

Material y equipo

• 1 jeringa descartable de 5 mL
•1 Tubos de Centrífuga
• 3 Tubos de ensayo pequeños
• 2 Pipetas graduadas de 0.1 mL
• 1 Pipeta graduada de 5 mL
• Centrifuga
• Espectrofotómetro
• 1 Gradilla para tubos
• 1 Gradilla para pipetas
• Papel Higienico

PROCEDIMIENTO

|Reactivo/Tubo |Muestra |Standard |Blanco|
|Muestra |0.08 mL |-- |-- |
|Standard (STD) |-- |0.08 mL |-- |
|Reactivo enzimatico |4.0 mL |4.0 mL |mL|

Mezclar en incubar a 37ªC por 5 minutos medir la absorbancia de la muestra y del Standard antes de 15 min. en el espectrofotómetro a 520 nm.

CALCULOS

Abs. De muestra x 8mg/dL = Acido urico mg/dL
Abs. De Standard

• Valores de Referencia

|Suero: Hombres |– 7.0 mg/dL o 200 – 420 mmol/L|
|Suero: Mujeres |2.4- 5.7 mg/dL o 140 – 340 mmol/L |
|Orina mujeres y hombres |250 – 750 mg por 24 horas o 1.5 – 4.5 mmoL/ 24 horas |

OBSERVACIONES

CONCLUSIONES

RESUMEN BIBLIOGRAFICO

Las bases nitrogenadas son compuestosorgánicos cíclicos, que incluyen dos o más átomos de nitrógeno. Son parte fundamental de los nucleósidos, nucleótidos, nucleótidos cíclicos (mensajeros intracelulares), dinucleótidos (poderes reductores) y ácidos nucleicos.

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Biológicamente existen seis bases nitrogenadas principales, que se clasifican en tres grupos,

• bases isoaloxazínicas (derivadas de la estructura de la...