Determinacion de azucares reductores

PRACTICA 4
DETERMINACIÓN DE AZUCARES POR EL METODO DNS

PREPARACIÓN DEL REACTIVO:
Disolver en ebullición 1g de 3,5dinitrosalicilico en 20 ml de solución de NaOH 2N (1.6 g de NaOH en 20 ml deSolución), añadir 30 g de tartrato doble de sodio y potasio a 50 ml de H2O destilada, calentar para disolver, mezclar las dos soluciones y aforar a 100 ml con H2O.
PREPARACIÓN DEL AMORTIGUADOR:
Mezclar 100 mlde ácido acetico 0.05 M (0.30 ml de ac. Acetico glacial en agua destilada aforando a 100 ml.) con 100 ml de acetato de sodio 0.05 M (0.680 g de acetato de sodio trihidratado aforando a 100 ml conagua destilada, ajustar a pH = 4.7.

TUBO | H2O | SOLUCIÓN DE GLUCOSA | DNS | SOL. pH = 4.7 reguladora | SOL. SACAROSA 0.3 M | V TOTAL |
0 | 1.5 | 0 | 2 ML | 1.0 ML | 1.0 ML | 5.5 ML |
1 | 1.4 | 0.1 |2 | 1.0 ML | 1.0 ML | 5.5 ML |
2 | 1.2 | 0.3 | 2 | 1.0 ML | 1.0 ML | 5.5 ML |
3 | 1.0 | 0.5 | 2 | 1.0 ML | 1.0 ML | 5.5 ML |
4 | 0.8 | 0.7 | 2 | 1.0 ML | 1.0 ML | 5.5 ML |
5 | 0.6 | 0.9 | 2 | 1.0ML | 1.0 ML | 5.5 ML |
6 | 0.4 | 1.1 | 2 | 1.0 ML | 1.0 ML | 5.5 ML |
7 | 0.2 | 1.3 | 2 | 1.0 ML | 1.0 ML | 5.5 ML |
8 | 0.0 | 1.5 | 2 | 1.0 ML | 1.0 ML | 5.5 ML |

METODO: A cada tubo se leadicionan 2 ml del reactivo de DNS

I) Incubar a ebullición todos los tubos 5 minutos. ENFRIAR (baño de hielo)
II) Agregar 15 ml de agua destilada a todos los tubos.
III) Leer a 630 nm en elespectrofotómetro.
IV) Realizar la curva de calibración ajustada por mínimos cuadrados.

Para determinar la concentración de azucares reductores de una muestra. ELABORAR una recta ajustada por el métodode mínimos cuadrados.

I) poner 0.5 ml de la solución problema en un tubo, 1 ml de sol. Amortiguadora y finalmente 1 ml de H2O. Y en ese momento agregar con 2 ll de reactivo de DNS,
II)incubar 5 en ebullición junto con el tubo blanco, que contiene 1.5 ml de H2O, 1 ml de amortiguador y 2 ml de DNS.
III) Dejar enfriar y agregar 15 ml de H2O, leer a 540 manómetros haciendo el cero con...