Determinacion de bilirrubina

INTRODUCCION

La bilirrubina es un producto derivado del metabolismo de la hemoglobina en el Sistema Retículo Endotelial. Los hematíes al degradarse liberan la hemoglobina que es metabolizada a dos moléculas el grupo hemo y el grupo globina, el grupo hemo se transforma en biliverdina y esta en bilirrubina a la cual se le llama no conjugada o indirecta. Al pasar por el hígado esta bilirrubinase conjuga con ácido glucurónido transformándose en bilirrubina conjugada o directa.
El hígado segrega esta bilirrubina directa a través de las vías biliares hacia el intestino, al metabolizarse por la flora intestinal se convierte en urobilinas que dan el color marrón a las heces. Parte de estas urobilinas se reabsorben y pueden aparecer en la orina en forma de urobilinógeno.
Cuando se elevala bilirrubina, la piel y los tejidos toman un color amarillo que se ictericia.
Cuando se realiza un análisis de rutina se mide la bilirrubina total (directa más indirecta), el 70 al 85 % corresponde a la bilirrubina no conjugada o indirecta

HISTORIA DEL METODO

En 1884 Erlich describió una reacción en la cual la bilirrubina está acoplada con ácido sulfanítico diazotizado (ácidop-diazobenzenesulfónico) para producir un compuesto azo. El compuesto es rosa en medio acido y azul en medio alcalino. La medición de la forma azul se ha vuelto mas popular por su gran sensitividad-
Se pueden identificar 2 tipos de bilirrubina sérica y cuantificarlos por reacción diazo. La forma directa consiste de un conjugado , derivados solubles e agua y reacciona en ausencia de un agente aceleradoro solubilizante. L forma indirecta, consiste de bilirrubina no conjugada, enlazada a albúmina sérica. Esta forma solo reacciona en presencia de un agente acelerador. A la suma de las dos formas se le llama bilirrubina total. La diferenciación entre directa e indirecta es importante cuado se trata de hallar las causas de hiperbilirrubinemia.

Muchas sustancias aceleran el acoplamiento de elreactivo diazo con la bilirrubina no conjugada. El metanol fue el primero, sugerido en los años 30´s por Evelyn y Malloy; con benzoato de cafeína/sodio de Jendrassik un poco después de la fecha de han reportado muchas modificaciones e improvisaciones.

Se han intentado otros agentes aceleradores y solubilizantes, incluido el 2- metoxietanol y la urea. En 1968 fue investigado el Dimetil Sulfoxido(DMSO) como un posible solvente para la bilirrubina total. El siguiente procedimiento DMSO basado en una modificacion de Walters y Gerarde. El método es efectivo, seguro y fácil de usar.

PRINCIPIO

El ácido sulfaitico reacciona con nitrito desodio para producir ácido sulfinitico diazotizado. La bilirrubina directa y la indirecta se acoplan con el ácido sulfanitico diazotizado paraproducir azobilirrubina en presencia de DMSO. L a identidad de color producido es directamente proporciional a la concentración de bilirrubina total presente en la muestra.

OBJETIVO

´
El objetivo de llevar a cabo el método para la determinación de bilirrubinas es para que el alumno adquiera los fundamentos de la prueba y aprenda la técnica mas efectiva, segura y fácil de realizar, y así de lamanera mas objetiva desarrolle la habilidad para interpretar los resultados obtenidos.

MATERIAL

+ Sistema Vacutainer
+ Ligadura
+ Torundas con alcohol
+ Tubo con anticoagulante
+ Tubos de ensayo
+ Gradilla
+ 2 Pipetas automatizadas
+ Puntillas desechables
+ Celda
+ Baño maria
+ Cronometro
+ Espectrofotómetro
+ Centrífuga

REACTIVOS

+ Reactivo de bilirrubina total
+Reactivo de nitrito de sodio
+ Calibrador de bilirrubina

PROCEDIMIENTO

Preparación de Reactivos para Bilirrubina Total

Identificar dos tubos; blanco calibrador y calibrador

Blanco Calibrador

1. Agregar al blanco calibrador:
1ml de Reactivo de bilirrubina
50uL de Calibrador de Bilirrubina
2. Incubar el tubo con la solución durante 1min. A 37°C
3. Transcurrido el tiempo vaciar...