Determinacion De Biomasa

DETERMINACION DE BIOMASA

I. INTRODUCCIÓN

La determinación de la biomasa es una de las variables más importantes de un bioproceso ya que su determinación nos lleva a la comprensión de la eficiencia del mismo. Se trata de una variable clave para establecer las tasas de producción, de consumo de nutrientes y el cálculo de los balances de masa de cualquier proceso biológico. Los métodosclásicos de determinación de biomasa son métodos directos que se basan en el número de células o en el peso celular. Los métodos de enumeración celular son métodos de observación, basados en propiedades físicas o en la actividad biológica. Actualmente hay un gran interés en métodos alternativos de determinación de la biomasa. Estos métodos son indirectos y estiman algún componente celular o algunaactividad metabólica específica. No requieren el examen visual de los organismos ni su incubación (Carol, 1991).

Chacón, 2007 nos presenta a continuación un breve resumen de los métodos de determinación de biomasa:

Métodos directos

* Métodos graviméiricos

* Métodos espectrofofométricos

* Métodos microscópicos de recuento celular en cámaras

* Microscopía deepifluorescencia : Naranja de acridina, DAPI, quelato de europio, Mg-ANS, CTC, SFDA, FISH.

Métodos indirectos

* Métodos fisicoquímicos indirectos: COT, DQO

* Componentes celulares:
Ácidos nucleicos
Proteinos
Polisocóridos
Lípidos
ATP

* Métodos bioquímicos

Actividad esterasa
Actividad deshidrogenasa

* Métodos cinéticos

Adaptaciones del Respirómetro de Warburg.
Tasa derespiración.
Tasa de desaparición de sustrato.
Potencial bioquímico de producción de metano.

El objetivo de la presente práctica es la determinación de biomasa de levaduras de panificación mediante el método de recuento microscópico, utilizando la cámara de Neubauer.

II. MARCO TEÓRICO

De acuerdo con Pirt, 1975 existen 2 tipos de medidas que comúnmente se realizan en biotecnología: lasmedidas del crecimiento y las de biomasa.
3.1 Medida del crecimiento
El crecimiento de una población bacteriana puede ser entendido desde diferentes perspectivas y de acuerdo a éstas se puede llegar a determinar la medida del crecimiento mediante diversas metodologías.
Para algunos, el crecimiento es la capacidad para multiplicarse que tienen las células individuales, esto es iniciar ycompletar una división celular. De esta forma, se considera a los microorganismos como partículas discretas y el crecimiento es entendido como un aumento en el número total de partículas bacterianas. Existen dos formas para determinar el número total de microorganismos en una muestra:
* Recuento microscópico de partículas
* Recuento electrónico de partículas
Para otros, el crecimientoimplica el aumento de los microorganismos capaces de formar colonias debido a que sólo se tiene en cuenta el número de microorganismos viables, esto es capaces de crecer indefinidamente. Las determinaciones que se utilizan son:
* Recuento de colonias
* Método del número más probable
Para los fisiólogos bacterianos, bioquímicos y biólogos moleculares una medida del crecimiento es elincremento de biomasa. Para ellos, la síntesis macromolecular y un incremento en la capacidad para la síntesis de los componentes celulares es una medida del crecimiento. Para este grupo la división celular es un proceso esencial pero menor que rara vez limita el crecimiento, ya que lo que limita el crecimiento es la capacidad del sistema enzimático para utilizar los recursos del medio y formarbiomasa.
* Determinación de peso húmedo
* Determinación de peso seco
* Determinación de nitrógeno total
* Determinación química de un ácido nucleico
Un último grupo entiende al crecimiento sobre la base de la influencia que ejercen los microorganismos en los cambios químicos de su entorno como consecuencia del incremento de la biomasa (Valencia, 1999).
3.2 Recuentos...