determinacion de caboxihemoglobina

TITULO: DETERMINACION DE CARBOXIHEMOGLOBINA
OBJETIVO:
Determinar cuali-cuantitativamente el porcentaje de carrboxihemoglobina, en relación con el porcentaje de hemoglobina, lo que permitiráestablecer el nivel de exposición a monóxido de carbono.

2. FUNDAMENTO:

La carboxihemoglobina es un pigmento hemático de color rojo carminado que en condiciones adecuadas puede ser extraído ymedido espectrofotométricamente. Para el cálculo se prepara un estándar al 100 % con una fracción de la muestra de sangre, por saturación con CO.

REACTIVOS MATERIALES Y EQUIPOS
- NaOH 10 % -Generador de CO
- Solución aceto-acética A+B (1:1) pH 5.05 - Baño María 55 °C
A.- Ácido acético glacial 30% v/v - Centrífuga
B.- Acetato de sodio trihidrato 40,8 % - Espectrofotómetro VIS
- Formiatode sodio (sólido) - Tubos de ensayo
- Ácido Sulfúrico conc. - Pipetas serológicas
- Solución antiespumante 1% (DC- antifoan o similar)
PROCEDIMIENTO:

Pruebas cualitativas:
1. R. Haldane.-Preparar soluciones sanguíneas al 1% v/v (sangre normal y sangre problema), observar simultáneamente:
- color rojo amarillento sangre normal
- color rojo carminado sangre que contiene COHb.
2. R.Alcalina.- Preparar soluciones de sangre (normal y problema) 3 gotas más 15 ml. de agua dest., añadir a cada tubo 2 ml. de NaOH 10 % y observar:
- Color castaño inmediatamente sangre normal
-Color carminado por cierto tiempo sangre con COHb.

3. R. al calor.- Colocar 1 ml. de sangre (normal y problema) en un tubo de ensayo cada una, colocar en B.M. hirviente por 10 min. observar.
- Colorcafé chocolate sangre normal
- Color rojo ladrillo sangre con COHb

Prueba cuantitativa:
• Medir 2,5 ml. de sangre (problema), colocar en un tubo de 15 ml o erlenmeyer con tapa, agregar 7,5ml. de agua destilada y 0,5 ml. de solución antiespumante.
• Separar la mitad del volumen obtenido (5 ml) en otro tubo o recipiente similar.
• Saturar una de las fracciones con CO por 30 min....