determinacion de colesterol HDL

NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Determinación de HDL- colesterol

TÉCNICA: espectrofotométrica

MÉTODO: precipitación y CHOP-POD enzimático colorimétrico

OBJETIVO: determinar la cantidad deHDL-colesterol

FUNDAMENTO:
Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y baja densidad (LDL) del suero o plasma, se precipitan con fosfotungstato en presencia de iones magnesio. Tras sucentrifugación, el sobrenadante claro conteniendo las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se emplea para determinar el colesterol HDL.

MATERIAL Y REACTIVOS:
Protocolo de Spinreact para Colesterol HDL reactivoprecipitante
Espectrofotómetro
Cubetas de 1 cm de paso de luz
Centrífuga
Tubos de centrífuga
Suero
Pipeta Pasteur
Gradilla
Tubos eppendorf (3)
Micropipeta automática de 1mL, 100µL y 10µLReactivo (ácido fosfotúngstico y cloruro de magnesio) listo para su uso.
La etiqueta del vial no presenta fecha de caducidad pero el protocolo nos indica que si se observa turbidez o partículas ensuspensión posiblemente sea porque esta deteriorado.
reactivo determinación de colesterol, el mismo de la práctica 15 (fecha de caducidad:2012/09/01)



PROCEDIMIENTO:

Precipitación

1 1.Dosificar en tubos de centrífuga:

R (μL)
100
Muestra (mL)
1,0

1 2. Mezclar y dejar reposar 10 minutos a temperatura ambiente.
2 3. Centrifugar 20 min a 4000 r.p.m
3 4. Recoger elsobrenadante y determinar el HDL Colesterol.
Ensayo

Proceder según lo indicado en las instrucciones de trabajo del reactivo de Colesterol:

1. Dispensar en cada tubo de ensayo:

Técnica
BlancoPatrón
Estándar

ml
ml
Ml
Muestra
--
0,01
--
Standard
--
--
0,01
Reactivo de trabajo
1,00
1,00
1,00

2. homogenizar en el vortex
3. dejar a temperatura ambiente 10 minutos
4. Leerla absorbancia del patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo.
5. Calcular las concentraciones a partir de las absorbancias obtenidas.
6. Realizar la curva de calibración y el control de...