Determinacion De Cuenta De Viavilidad Celular

Laboratorio de Integración Básico. Módulo de Biología Celular
Práctica No. 5
“Determinación de la Concentración y Viabilidad celular”

Objetivo

Que el alumno adquiera habilidades en el usode la cámara de Neubauer como una herramienta para el conteo y viabilidad celular en el laboratorio de biología celular.


Introducción

Una suspensión celular se caracteriza por presentar unnúmero de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión, así como el porcentaje de éstas que son viables.Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, desde la relativamente simple cámara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre ellas la que empleamos(cámara de Neubauer), hasta equipos automáticos de contaje celular como el "Cell Coulter" de la empresa Beckman-Coulter. La cámara de Neubauer o hemacitómetro (ver fígura 1), es utilizada generalmentepara la cuenta de células sanguíneas como son los eritrocitos (glóbulos rojos), leucocitos (glóbulos blancos), y plaquetas, pero también puede ser utilizada para el conteo de otros tipos celulares. Lasáreas grandes indicadas con los números 1, 2, 3 y 4 en la figura 1 son utilizadas para contar los lelucocitos y el área con el número 5 es para contar los eritrocitos.Figura 1. Representación de los cuadrantes en la cámara de Neubauer.

Equipo y materiales
Campana de flujo laminar (Purifier Class II Biosafety Cabinet, delta series, LABCONCO).
Micropipetade volumen variable de 100-1000 μL.
Micropipeta de volumen variable de 2-20 μL.
Cámara de Neubauer línea brillante(Hausser scientific).
Microscopio Invertido (Leica).
Microscopio óptico (Leica).Puntas estériles para micropipeta.
Tubos eppendorf de 1.5 mL.
Gradilla para tubos eppendorf.
Guantes de latex (Es obligación del estudiante)

Reactivos
1. PBS 1X pH 7.2
NaH2PO4...