Determinacion de glucogeno

Glucógeno - 1

AISLAMIENTO DE GLUCÓGENO HEPÁTICO Y OBTENCIÓN DE GLUCOSA

1. - FUNDAMENTO TEÓRICO Los seres vivos almacenan glúcidos en forma de polisacáridos, que sirven como materiales dereserva. El almidón, la inulina en los vegetales superiores y el glucógeno en los animales. El glucógeno consta de cadena de glucosa unidas por enlaces glicosídicos α(1-4) y ramificaciones, cada 8 ó 10unidades, de glucosa mediante enlace glicosídico α (1-6).

Enlace glucosídico α (1-6)

El glucógeno es especialmente abundante en el hígado en donde puede ocupar hasta un 10% de su peso y en músculo,un 1%. En situación de ayuno, el glucógeno es la primera reserva que se moviliza para mantener la glucemia, al menos durante dos horas. La extracción del glucógeno del hígado de esta práctica implicaun proceso de homogenización del tejido y ruptura celular, así como la extracción y la eliminación de las proteínas (desproteinizar) para evitar interferencias en los análisis posteriores. Para lavaloración posterior de la glucosa (que en esta práctica solo se realizará de forma cualitativa) hay que someter al precipitado de glucógeno a una hidrólisis ácida, de esta forma se rompen los enlacesglicosídicos y se libera glucosa. La valoración cualitativa de la cantidad de glucosa presente en cada hidrolizado se realizará con una sal de cobre (II) en medio alcalino (Reactivo de Nelson),aprovechando el carácter reductor que tienen todos los monosacáridos. La reacción que tiene lugar será:
glucosa

Cu (color azul ) pH>8

2+

Cu2O (precipitado de color lila)

2. -MATERIAL Y REACTIVOSGlucógeno - 2

Material
.- Tubos de ensayo de plástico translúcido .- Tubos de vidrio graduados .- Pipetas .- Centrífuga de mesa .- Papel indicador de pH

Reactivos
.- KOH al 30% .- Na2SO415% .- Alcohol etílico .- H2SO4 5N y 1N .- NaOH 5N .- Fenolftaleína (en etanol) .- Tampón fosfato 0,2 M, pH=7.4 .- Solución salina de NaCl (9 g/l) .- CuSO4 al 1% .- Na2CO3 al 2% en NaOH 1M

3. -...