Determinacion de glucosa.


1. INTRODUCCIÓN/ FUNDAMENTO.
“Determinación de triglicéridos en suero mediante el método enzimático colorimétrico a punto final.”
El método para la determinación de triglicéridos se basa en ladeterminación enzimática de glicerol utilizando la enzima oxidasa glicerol fosfato (GPO) después de la hidrólisis por la lipoproteína lipasa. Los triglicéridos del suero son hidrolizados a glicerol yácidos grasos libres mediante la LPL (lipasa). En presencia de ATP y GK (la quinasa del glicerol), el glicerol se convierte en glicerol- 3- fosfato y obtenemos ADP. El glicerol- 3- fosfato se oxida porla acción de la enzima GPO (Oxidasa Glicerol Fosfato), para producir H2O2 (peróxido de hidrógeno) y dihidroxiacetona fosfato. La condensación del con H2O2 con 4-Aminoantipirina y 4-Clorofenol enpresencia de POD (Peroxidasa) produce una coloración roja de la quinoneimina que absorbe a 500nm. La intensidad de color formado es directamente proporcional a la concentración de triglicéridos en lamuestra. El espectrofotómetro nos puede facilitar el resultado en absorbancia, en cuyo caso haríamos un cálculo sencillo para hallar la concentración de triglicéridos o nos puede dar el resultado en mg/dl.2. MATERIAL USADO.
Papel de filtro.
Gradilla de corcho.
Cubetas micro.
Micropipetas (1000µl y 10µl).
Puntas blancas.
Puntas azules.
Cronómetro.
Vaso de precipitados.
Papel parafilm.
3.REACTIVOS.
Suero fisiológico.
Reactivo de gernon.
Estándar de gernon.
4. MUESTRA.
Muestra (suero) Nº2.
5. PROCEDIMIENTO.
1. Cubrimos la zona de trabajo con papel de filtro.
2. Colocamos todo elmaterial en la zona de trabajo.
3. Atemperamos la muestra y los reactivos.
4. Encendemos el espectrofotómetro y lo programamos.
5. Pipeteamos 1000µl de reactivo en las tres cubetas.
6. Pipeteamos10µl de suero fisiológico en la cubeta del blanco.
7. Pipeteamos 10µl de calibrador en la cubeta del estándar.
8. Pipeteamos 10µl de suero en la cubeta de la muestra.
9. Tapamos con papel...