Determinacion de la actividad ureasica en comida para animales

Determinación de la actividad ureásica en comida para animales. Método de la variación del pH.
A. Principio
Este ensayo puede utilizarse para conocer si la enzima Ureasa ha sido inactivada porel calor en harinas desengrasadas o si a una harina de cualquier cereal, especialmente trigo, se le ha adicionado harina de soja enzimáticamente activa.
Se trata de un método indirecto basado en lavariación del pH.
Se incuba una solución de la muestra con urea. La Ureasa cataliza la descomposición de urea en Amoníaco, dióxido de Carbono y agua. El amoníaco aumenta el pH del sustrato.
Losvalores aceptables oscilan entre 0.05 y 0.5; valores menores indican sobrecocimiento y mayores falta de cocimiento.

B. Aparatos
a. Baño termostático, precisión ±0.5ºC.
b. Tubos de ensayo grandes(20 x 150 mm) con tapón de hule.
c. Peachímetro con electrodo de vidrio y calomel adecuado para medir muestras de 5ml, precisión de ± 0.01 unidades de pH y compensación de temperatura.
f. Vasos deprecipitado de 10 ml.

C. Reactivos
a. Rojo fenol al 0,1%
b. Solución de NaOH 0,2N.
c. Dihidrógeno fosfato de Potasio (PO4H2K)
d. Hidrógeno fosfato de Potasio (K2HPO4).
e. Urea P.A.D. Preparación de las soluciones
a. Solución buffer pH 7: Se disuelven 3,403 g de Fosfato diácido de potasio (KH2PO4) en unos 60 ml de agua destilada. Luego se agregan 4,355 g de Fosfato monoácidode Potasio (KHPO4). Se llevan a un matraz aforado de 1000 ml y se agrega agua hasta unos 200 ml con unas gotas de rojo fenol.
Se lleva a 1000 con agua destilada. Verificar que el pH final sea 7,00. Enrefrigeración, tiene una vida útil de 90 días.
b. Solución de urea en buffer fosfatos: Se disuelven 15 gr de urea P.A. en la solución buffer preparada anteriormente. Se lleva a volumen en un matrazde 500 ml con la solución de pH 7. Esta solución debe prepararse en el momento y el pH debe ser 7.
c. Indicador de rojo fenol al 0.1%: Disuelva 0.1 gr de rojo fenol en 15 ml de solución de...