Determinacion de la curva de crecimiento y el efecto de factores ambientales en un cultivo bacteriano

Practica No 6: DETERMINACION DE LA CURVA DE CRECIMIENTO Y EL EFECTO DE FACTORES AMBIENTALES EN UN CULTIVO BACTERIANO

1. METODOLOGIA
El objetivo al realizar esta práctica es establecer la curva de crecimiento de un cultivo bacteriano, posible, únicamente, de determinar en medios líquidos; y la identificación del efecto de algunos factores ambientales en el desarrollo de un cultivo bacteriano.Las bacterias, como otros seres vivos necesitan de una serie de condiciones o factores ambientales para su desarrollo y crecimiento como población. Estos factores se clasifican en Abióticos, relacionados con agentes propios del medio como la temperatura, el pH, gases respiratorios (O2 y CO2), radiaciones (lumínicas, sonoras, electromagnéticas), la presión (atmosférica, hidrostática, osmótica) ypresencia de nutrientes. Y los Bióticos relacionados con las interrelaciones que se dan entre las diversas poblaciones y comunidades. En el medio en que determinada bacteria se encuentra en condiciones optimas, ocurre inicialmente un crecimiento en masa celular y seguidamente, en el número de células a medida que avanza el tiempo. Este crecimiento comprende cuatro fases: la primera Fase o deRezago, consiste en la adaptación de las células microbianas a su nuevo ambiente. En esta fase, las células microbianas se envuentran empobrecidas en cuanto a metabolitos y enzimas, esto debido a las condiciones desfavorables que representaba el cultivo previo. En la segunda Fase o Exponencial, como el nombre lo indica, en esta fase las células se encuentran en un estado de crecimiento sostenido.Se sintetiza nuevo material celular a una tasa constante, pero éste material es en sí catalítico y la masa aumenta de manera exponencial. Lo anterior continua hasta que uno o más nutrimentos se agoten, o hasta que se acumule tal cantidad de metabolitos tóxicos que se inhiba el crecimiento. El nutrimento limitante para los organismos aerobios suele ser el oxígeno : cuando la concentraciónbacteriana es de aproximadamente 1 x 107 / ml es necesario incrementar el ingreso de oxígeno mediante agitación o burbujeo ; pero cuando la concentración alcanza 4 o 5 x 109 bacterias por ml, la tasa de difusión de oxígeno no puede satisfacer las demandas aun en un medio aireado, por lo que el crecimiento disminuye progresivamente. La tercera fase o estacionaria Máxima, como se explicó en la descripciónde la fase anterior, ante el agotamiento de nutrimentos en el medio o la acumulación de metabolitos tóxicos el crecimiento cesa por completo después de un periodo de decrecimiento en la tasa de crecimiento, lo cual corresponden a la fase D o de retraso. La duración de esta fase depende de la naturaleza del microorganismo y de las condiciones del medio. La última fase, fase de Declinación, tambiénconocida como fase de muerte, representa el decremento de células debido al aumento progresivo de la tasa de mortalidad, misma que tarde o temprano alcanza un valor sostenido. Por lo general, una vez que la mayoría de las células ha muerto, la tasa de mortalidad disminuye bruscamente, por lo que un número pequeño de sobrevivientes pueden persistir en cultivo por meses o años. Dicha persistenciapuede deberse a que las células consiguen crecer gracias a los nutrimentos liberados por las células que mueren y se lisan observándose recambio celular. Para la determinación de la curva de crecimiento se procedió a inocular un cultivo bacteriano en un nuevo medio liquido para posteriormente ser llevado a espectofotometro, un aparato que esencialmente posee una lámpara que emite luz condiferentes ondas, que van desde los 320 nm hasta los 1000 nm, es decir emite rayos que van en un rango desde la luz ultravioleta (200-300), pasando por rango de luz visible (hasta 700) y atraviesa la luz infrarroja. Este aparato permite cuantificar la luz que se dispersa o pasa directamente por el medio estudiado. En este caso para el trazado de la curva es necesaria la densidad óptica, determinada...