DETERMINACION DE PLOMO EN SANGRE POR ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA

DETERMINACION DE PLOMO EN SANGRE POR ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN Este método especifica el procedimiento a seguir y el equipo necesario para la determinación de plomo (Nº CAS 7439-92-1) en sangre por espectrofotometría de absorción atómica, en un intervalo de concentración de 5 a 100 µg de Pb/100 ml de sangre (0,24 a 4,82 µmol/litro) aplicable alseguimiento de poblaciones laborales potencialmente expuestas a plomo metálico y sus compuestos iónicos. La interferencia espectral provocada por la absorción inespecífica, que tiene lugar a la longitud de onda de trabajo, hace necesario el uso de un sistema corrector de la radiación de fondo.
2. FUNDAMENTO DEL MÉTODO Las muestras de sangre se recogen en tubos de polietileno conteniendo EDTA-K2 (saldipotásica del ácido etilendiaminotetracético) como anticoagulante. La sangre se diluye con un tensoactivo para facilitar su hemólisis. La cuantificación del plomo presente se efectúa por espectrofotometría de absorción atómica a 283,3 nm, utilizando cámara de grafito con plataforma de L'vov y modificación de matriz (9.1), frente a una curva de patrones acuosos.
4. APARATOS Y MATERIAL 4.1. Tubos depolietileno Tubos de polietileno de 5 ml, exentos de plomo, conteniendo EDTA-K2 (sal dipotásica de árido etilendiaminotetracético) como anticoagulante. 4.2. Cubiletes desechables de poliestireno Cubiletes desechables de poliestireno, de fondo cónico, de 2 ml de capacidad. 4.3. Tubos de grafito pirolizados Tubos de grafito pirolizados, de 28 mm de longitud y 6 mm de diámetro interno, conplataforma de L'vov (9.1 y 9.2). 4.4. Agitador homogeneizador Agitador homogeneizador para las muestras de sangre. 4.5. Pipetas automáticas y dosificadores Pipetas automáticas y dosificadores que cumplan los requisitos recogidos en ISO 8655. 4.7. Cámara de grafito Cámara de grafito capaz de satisfacer el programa de análisis propuesto en 6.4.2. 4.8. Espectrofotómetro de absorción atómica Espectrofotómetrode absorción atómica equipado con lámpara de plomo y corrector de absorción inespecífica.
5. TOMA DE MUESTRAS La muestra de sangre venosa extraída con jeringa de polietileno o poliestireno se recoge en tubos de polietileno de 5 ml conteniendo EDTA-K2 como anticoagulante, mezclándola cuidadosamente. Las muestras se conservarán a 4 °C hasta el momento del análisis.
6. PROCEDIMIENTO DE ANÁLISIS
6.1.Limpieza de material 6.1.1. Todo el material de vidrio utilizado en el análisis después de su lavado con un detergente, debe mantenerse sumergido varios minutos en ácido nítrico al 50% (V/V) y ser después cuidadosamente enjuagado con agua (3.1). 6.1.2. Los tubos de grafito nuevos y los usados, tras un período fuera de uso, deben acondicionarse siguiendo las recomendaciones del fabricante. 6.1.3.Las ventanas de cuarzo de la cámara de grafito deben limpiarse periódicamente para eliminar las salpicaduras que sobre ellas se depositan. 6.1.4 Los conos de plástico para las micropipetas y los cubiletes de poliestireno deben mantenerse en sus bolsas de origen hasta el momento de su uso, para evitar cualquier contaminación.
6.2. Preparación de la muestra 6.2.1. La sangre se homogeneizaperfectamente en un agitador (4.4) una vez alcanzada la temperatura ambiente. 6.2.2. Se.pipetean 600 µl del modificador de matriz preparado según 3.10, en un cubilete de fondo cónico (4.2). 6.2.3. Se añaden 50 µl de sangre con pipeta automática y con el mismo cono de plástico utilizado se remueve el contenido del cubilete hasta conseguir una completa homogeneización. La muestra así preparada está lista parasu introducción directa en el horno de grafito.
6.3. Preparación de patrones y curva de calibración 6.3.1. Disoluciones de trabajo. A partir de la disolución patrón de plomo de 1.000 µg/ml (3.9) y con las diluciones pertinentes se preparan las disoluciones de trabajo de 0,2; 0,4; y 0,8 µl de Pb por ml de agua (3.1) 6.3.2. Se pipetean 600 µl de modificador de matriz (3.10) en los cubiletes de...