Determinacion de proteinas Metodos

571500114300INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO
MÉTODOS DE ANÁLISIS
Determinación de proteínas por el método de Bradford y LowryProfesora: Juana Mercedes Espinosa Lara
Alumno: De la Vega Camarillo Esaú
Grupo: 5QM2 Sección: 2
Fecha de realización de la práctica:
Miércoles 9 de Septiembre-Viernes 11 deSeptiembre
Fecha de Entrega:
Viernes 18 de Septiembre
00INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO
MÉTODOS DE ANÁLISIS
Determinación de proteínas por el método de Bradford y LowryProfesora: Juana Mercedes Espinosa Lara
Alumno: De la Vega Camarillo Esaú
Grupo: 5QM2 Sección: 2
Fecha de realización de la práctica:
Miércoles 9 deSeptiembre-Viernes 11 de Septiembre
Fecha de Entrega:
Viernes 18 de Septiembre
62865000000508000
INTRODUCCIÓN.
Hoy en día determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una técnica de rutina básica cuando se aborda un esquema de purificación de una proteína concreta, cuando se quiere conocer la actividad específica de una preparación enzimática, para eldiagnóstico de enfermedades, así como para otros muchos propósitos.
Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: a) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV, b) para la formación de derivados químicos, o c) la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes.
El método de Lowry se basa en lareacción de las proteínas con el reactivo de Folin dando un complejo coloreado. Este reactivo es una disolución de tungstato sódico y molibdato sódico en ácido fosfórico y ácido clorhídrico. El mecanismo primeramente es la reacción de biuret donde el cobre reacción con los enlaces peptídicos, posteriormente el ion del cobre junto con los anillos aromáticos de los aminoácidos reaccionan con elreactivo de Folin generando un producto inestable que se reduce para formar un compuesto colorido.
El método de Bradford se basa en la unión de un colorante, Comassie Blue G-250 (también Serva Blue) a las proteínas. El colorante, en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente deextinción mayor que el colorante libre. Este método es sensible (1-15 μg), simple, rápido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinación. Entre las sustancias que interfieren están los detergentes y las soluciones básicas.
OBJETIVOS
Elaborar una curva de calibración para la cuantificación de proteínas empleando un método fotométrico.
Determinar si hay diferenciasignificativa en precisión y exactitud entre los métodos de Bradford y Lowry.
Determinar el efecto de sustancias no proteínicas en ambos métodos.
DATOS EXPERIMENTALES E INFORME
3086100247015
00
TABLA 1. Curva de calibración
de Hemoglobina (Método de Lowry)
Tubo No. Cantidad de Proteína (microgramos) A590
1 25 0.06
1' 25 0.056
2 50 0.087
2' 50 0.085
3 75 0.127
3' 75 0.137
4 100 0.153
4' 1000.177
5 125 0.191
5' 125 0.21
Calcule y escriba los valores de la pendiente, ordenada al origen y el coeficiente de correlación. Diga cómo se interpretan para la curva de calibración.
Pendiente: B=0.0015
Ordenada al origen: A=0.0191
Coeficiente de Correlación. R=0.97646
A medida que aumenta aritméticamente la cantidad de proteína aumenta también la absorbancia de manera exponencial.
¿Cumplesu curva la Ley de Bouger y Beer? ¿Entre qué limites de cantidad de proteína?
Si se cumple porque la ley relaciona la intensidad de luz entrante en un medio con la intensidad saliente después de que en dicho medio se produzca absorción, la curva se observa en un intervalo de 50 a 125 ug. de proteína
A partir de la recta ajustada por regresión lineal y la ecuación de la misma, obtenga la...