Determinacion de Proteinas

BIOQUÍMICA DE LOS ALIMENTOS


Trabajo Práctico
Determinación de proteínas














Determinación de proteínas
La determinación de Nitrógeno y proteínas se puede realizar,mediante el Método Kejeldahl. Este determina la materia nitrogenada (tanto las no proteínas, como las proteínas verdaderas).
Principio: se basa en la digestión completa de la muestra con acidosulfúrico concentrado y caliente, en presencia de sulfato de cobre como catalizador, lo que convierte al nitrógeno orgánico en ion amonio.
Posteriormente, por adición de álcali se libera amoníaco que sedestila sobre un exceso de solución de ácido bórico y se determina por titulación con ácido clorhídrico.

Ensayo de Biuret: es un ensayo calorimétrico, donde se cuantifica la formación de un complejoestable entre proteínas y cobre (II). El complejo presenta un color violeta, que se da por la coordinación de un átomo de cobre con cuatro átomos de nitrógeno.
Compuestos con enlaces peptídicos,producen un cambio de color del azul al purpura cuando reaccionan con cobre (II) en medio alcalino.

Ensayo de Bradford: es rápido y sensible para cuantificar proteínas. Se basa en el cambio de colordel colorante azul “coomassie” en medio ácido cuando hay presencia de proteínas. Estas producen el cambio de la coloración anaranjada del reactivo a una coloración azulada, cuya intensidad esproporcional a la concentración de proteínas.

Procedimiento:
Para determinar las proteínas presenten en la clara del huevo (previamente acondicionada), utilizamos el método de Bradford.
Primeropreparamos una dilución 1:5 y a partir de esta diluimos nuevamente 1:10.
Tomamos cuatro tubos de ensayo, los cuales fueron rotulados respectivamente del 1 al 4:
Tubo 1: le colocamos 2,4 ml de agua y 600 µldel reactivo de Bradford (este es nuestro blanco).
Tubo 2: le colocamos 2,1 de agua, 300 µl de albúmina y 600 µl del reactivo de Breadford.
Tubo 3: le colocamos 1,8 ml de agua, 600 µl de albúmina...