determinacion de proteinas

DETERMINACION DE PROTEINAS

OBJETIVO
Realizar una serie de pruebas químicas para la identificación de azucares reductores.
INTRODUCCION
Las proteínas son los materiales que desempeñan un mayor número de funciones en las células de todos los seres vivos. Por un lado, forman parte de la estructura básica de los tejidos (músculos, tendones, piel, uñas, etc.) y, por otro, desempeñanfunciones metabólicas y reguladoras (asimilación de nutrientes, transporte de oxígeno y de grasas en la sangre, inactivación de materiales tóxicos o peligrosos, etc.). También son los elementos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la estructura del código genético (ADN) y de los sistemas de reconocimiento de organismos extraños en el sistema inmunitario.  (htt)
Existen variosmétodos para la cuantificación de las proteínas, pero la mayoría tiene como principio alguna reacción química de los grupos arilo o alquilo de los diferentes aminoácidos
El método de biuret es la técnica más simple para la determinación de proteínas solubles. Las sustancias que contienen dos o más enlaces peptídicos forman un complejo purpura-violeta con sales de cobre (II) alcalinas. Es posibleque el color se desarrolle por la formación de un ion coordinado, tetra cúprico con dos grupos amida adyacente.
El desarrollo del color es diferente para cada proteína y su intensidad se puede determinar espectroscópicamente a 540nm. La cuantificación proteica se lleva a cabo con una curva patrón, utilizando el principio establecido por la ley de Beer. Un ámbito adecuado para la determinación dela masa de proteína por este método oscila entre 20 y 40 mg de proteína (v.)
Existen pocas interferencias en esta determinación; entre ellas, la presencia del ion amonio altera el desarrollo del color; algunos pigmentos absorben a la misma longitud de onda; algunos lípidos y carbohidratos son capaces de formar complejos con el ion coordinado
El contenido total de proteínas en los alimentosestá conformado por una mezcla compleja de proteínas. Estas existen en una combinación con carbohidratos o lípidos, que puede ser física o química. Actualmente todos los métodos para determinar el contenido protéico total de los alimentos son de naturaleza empírica. Un método absoluto es el aislamiento y pesado directo de la proteína pero dicho método se utiliza  sólo a veces en investigacionesbioquímicas debido a que es dificultoso y poco práctico
En 1883 el investigador danés Johann Kjeldahl desarrolló el método más usado en la actualidad para el análisis de proteínas (método Kjeldahl) mediante la determinación del nitrógeno orgánico. En esta técnica se digieren las proteínas y otros componentes orgánicos de los alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores. El nitrógeno orgánico total se convierte mediante esta digestión en sulfato de amonio.  La mezcla digerida se neutraliza con una base y se destila posteriormente. El destilado se recoge en una solución de ácido bórico.  Los aniones del borato así formado se titulan con HCl (o H2SO4) estandarizado para determinar  el nitrógeno contenido en la muestra.
El resultado del análisis es una buenaaproximación del contenido de proteína cruda del alimento ya que el nitrógeno también proviene de componentes no proteicos.
El método Kjeldahl ha sufrido varias modificaciones. Originalmente se utilizó permanganato de potasio para llevar a cabo el proceso de oxidación (digestión), sin embargo, los resultados no fueron satisfactorios, de manera que este reactivo se descartó.  En 1885 Wilforth encontróque se podía acelerar la digestión utilizando ácido sulfúrico y añadiendo un catalizador.  Gunning en 1889 propuso añadir  sulfato de potasio que eleva el punto de ebullición del ácido sulfúrico utilizado en la digestión para disminuir el tiempo de la reacción.
En  la actualidad se utiliza principalmente Sulfato de Cobre penta hidratrado CuSO4.5H2Ocomo catalizador. (htt1)

MATERIAL, REACTIVOS...