Determinacion De Proteinas

DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo y esenciales para la vida. Actúan como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación, etc.
Las proteínas están presentes en todas las células y en los distintos líquidoscorporales: suero o plasma (66-83g/L), orina (100-200 mg/L), líquido
cefalorraquídeo (15-45 mg/dL).
Si nos centramos en las proteínas plasmáticas, podemos diferenciar:
· Proteínas plasma-específicas: componentes habituales del plasma.
· Proteínas no plasma-específicas: aquellas que aparecen en el plasma
por rotura de otras células.
Las proteínas plasma-específicas (albúmina + globulinas) sesintetizan
fundamentalmente en el hígado, pero también en: células plasmáticas,
ganglios linfáticos, bazo y médula ósea.
La proteína más abundante en plasma es la albúmina. Una de sus funciones más importantes es la de permitir el transporte de ácidos grasos, hormonas esteroides, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son insolubles en medio acuoso.

La concentración de albúmina enplasma influye notablemente en el mantenimiento de la presión coloidosmótica, lo que estaría relacionado con su relativamente bajo peso molecular y su gran carga neta.
En condiciones patológicas como pérdidas renales, desnutrición, infecciones prolongadas, etc., suelen presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma múltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentraciones de diversosorígenes, se observan hiperproteinemias.

En general, ambas situaciones se ven acompañadas también por hipoalbuminemias. Los aumentos anormales de albúmina son ocasionales y se relacionan casi siempre con deshidratación que produce el consecuente aumento en el contenido proteico del plasma

CUANTIFICACION DE PROTEINAS TOTALES
Los principales métodos empleados para la determinación deproteínas totales son los siguientes:
· MÉTODO DEL BIURET
En solución alcalina el Cu+2 reacciona con el enlace peptídico de las proteínas dando un color purpúreo que se cuantificaespectrofotométricamente (540nm). Como estándar se utiliza una solución de albúmina.
Proteína + Cu+2 Complejo Cu-Proteína (púrpura)
Muestra: suero o plasma (heparina o EDTA). Separar el suero del coágulo o el plasma de lascélulas antes de 3h. Si el paciente está acostado durante la extracción el resultado será menor.
· MÉTODO DE LOWRY
Dependen de la concentración de tirosina y triptófano de la muestra.
Consiste en dos reacciones:
1. Reacción de Biuret
2. Reacción de Folin: característica de los grupos –OH reductores de los aminoácidos tirosina y triptófano que, junto con los complejos Cu+2 reducen elreactivo de Folin generando un color azul.
Está sujeto a muchas interferencias. Se utiliza fundamentalmente en orina.
☞Turbidimetría
Medición de la turbidez resultante de la precipitación de proteínas
☞Absorción en el ultravioleta
Se mide la absorbancia a 270nm originada fundamentalmente por los anillos aromáticos de triptófano y tirosina.
☞Métodos de unión a colorantes
TECNICAS DE SEPARACIONY ANALISIS DE PROTEINAS
La proporción de las fracciones proteicas individuales cambia en el transcurso de un gran número de enfermedades lo que conlleva que, la cuantificación de las mismas sea de valor considerable en el diagnóstico clínico.
Los procedimientos más utilizados actualmente en el laboratorio clínico para el estudio de las proteínas son los siguientes:
1. Turbidimetría ynefelometría
2. Inmunodifusión
3. Electroforesis
4. Inmunoelectroforesis
5. Inmunoelectroforesis en cohete
6. Inmunofijación
7. Cromatografía

TURBIDIMETRIA Y NEFELOMETRIA
Cuando un haz de luz choca con una partícula en suspensión parte de la luz se dispersa, parte de la luz se refleja y parte de la luz se absorbe.
La dispersión de la luz depende de: la longitud de onda de la luz (?), del...