Determinacion de vitaminas liposolubles

ANÁLISIS DE LIPIDOS POR HPLC
HPLC: análisis de TGs y fosfolípidos. Moléculas pequeñas como FA y
esteroles: GC.
Preparación muestra: líquida (inyección directa de aceites). Sólidos:
extracción con solvente apolar (aislar TGs) y clean-up.
Triglicéridos: interés para procesado y control alimentos
Grasas: mezclas complejas de TGs, esteroles y vitaminas
Formación hidroperóxidos
enranciamientoHPLC:

- contenido en TGs, esteroles, vitaminas e hidroperóxidos
(UV-DAD), para diferenciar entre TGs saturados e insaturados
- perfil de TGs específico a cada tipo de aceite, permite
detectar adulteraciones
Detección: índice refracción (isocrático). Gradiente con detectores UV y
ELSD.

-Separación lípidos sencillos: determinar fracciones de ésteress de
esteroles, ácidos grasoslibres, TG, DG, esteroles libres,
monoacilgliceroles, ceras. Tradicionalmente análisis cromatografía
adsorción columnas sílice y ELSD.
-Cromatografía reparto: RP y NP. Separación TGs con RP y fase móvil
no acuosa (acetonitrilo:acetona) permite separación en función número
C.

Análisis de perfil de TGs en aceite de girasol envejecido.
Detección entre 200-215 nm: TGs
Detección a 240 nm:hidroperóxidos
Detección a 280 nm: TGs fragmentados

ANÁLISIS DE VITAMINAS POR HPLC
- Liposolubles: A, D, E
- Hidrosolubles: C, B6, B12, B2, B1
- Importancia: legislativa, etiquetado, asegurar calidad alimentos
suplementados, estudiar cambios durante procesado, almacenamiento,
etc.
Dificultad análisis:
- bajas concentraciones
- en presencia de otros compuestos en elevadas
concentraciones ycon propiedades químicas similares
- se degradan con luz, O2, elevadas Tª
HPLC:

- información cualitativa y cuantitativa (UV-DAD y
electroquímica)

Vitaminas hidrosolubles: problemas análisis de estas vitaminas
relacionados con preparación muestra antes del análisis por HPLC
debido a que estas vitaminas se encuentran a menudo ligadas a otros
constituyentes como carbohidratos yproteínas.
Vitamina C: 2 vitámeros, ac. Ascórbico y dehidroascórbico.
Actúan en otras funciones, previniendo cancer, hipertensión, etc.
Problema: baja estabilidad. Extracción utilizando ácidos
(metafosfórico).
Análisis HPLC fase inversa con agua a bajos pH. Detección: UV a 254
nm (AA) y 210-230 nm (DHAA)
Detección fluorescencia después derivatización

Vitamina B1 (tiamina): 4 vitámeros, la formano fosforilada (tiamina)
mayoritaria en plantas y formas fosforiladas mayoritarias en
productos animales. Deficiencia tiamina asociada a beri-beri.
Extracción: hidrólisis ácida para liberar vitámeros de matrices
alimentarias. A veces es necesaria hidrólisis enzimática para eliminar
exceso de almidón y proteínas.
Clean-up con SPE C18 o columnas intercambio iónico
Análisis HPLC: par iónicoDetección: fluorescencia (excitación 365-375 nm y emisión 425-435
nm) después derivatización.
Análisis vitaminas hidrosolubles en una bebida y espectros vitaminas.
Fase inversa, DAD, Fase móvil: A: agua, B: ACN. Gradiente.
Preparación muestra (reales): extracción, hidrólisis, oxidación, clean-up,
etc.

- Vitaminas liposolubles: se pueden dividir en 4 grupos dependiendo de
su actividadbiológica: vitamina A (retinol y carotenoides), vitamina D
(colecalciferol y ergocalciferol), vitamina E (tocoferoles y tocotrienoles)
y vitamina K (filoquinona y menaquinona).
- Vitamina A: esencial visión, crecimiento, sistema inmune. Fuentes
naturales vitamina A derivan de carotenoides (provitamina A)
sintetizados por plantas superiores y organismos fotosintéticos
- Vitamina A sintéticase utiliza como suplemento.
-Análisis: - saponificación (liberar retinol esterificado)
- extracción
- o extracción directa (hexano) p.ej. vitamina A total leches
- análisis HPLC: fase normal o inversa
- inversa mejor cuando muestra contiene bajas concentraciones de
triglicéridos
- detección: UV (328 nm) (fluorescencia nativa baja)
- Vitamina D: prevención raquitismo y osteomalacia...