Determinacion De

PROTEINAS




INTRODUCCIÓN



Si en una disolución de proteínas se producen cambios de pH, alteraciones en la concentración, agitación molecular o variaciones bruscas de temperatura, lasolubilidad de las proteínas puede verse reducida hasta el punto de producirse su precipitación. Esto se debe a que los enlaces que mantienen la conformación globular se rompen y la proteína adopta laconformación filamentosa. De este modo, la capa de moléculas de agua no recubre completamente a las moléculas proteicas, las cuales tienden a unirse entre sí dando lugar a grandes partículas queprecipitan. Además, sus propiedades biocatalizadores desaparecen al alterarse el centro activo. Las proteínas que se hallan en ese estado no pueden llevar a cabo la actividad para la que fueron diseñadas, enresumen, no son funcionales.

ELECTROFORESIS

Una de las técnicas más sencillas para la separación (y posterior cuantificación) de proteínas es la electroforesis (técnica en la cual una partículacargada se hace desplazar a través de un medio aplicando un campo eléctrico). Cuando se aplica un campo eléctrico a un medio que contiene partículas cargadas, las partículas cargadas negativamentemigran hacia el ánodo o polo positivo mientras que, las cargadas positivamente migran hacia el
electrodo negativo (cátodo).Este principio se puede aplicar para separar las fracciones de proteínas puestoque los aminoácidos (aa) constituyentes de la proteínas, y por tanto
las proteínas, son compuestos anfóteros que se comportan como ácidos (ceden protones y quedan con carga negativa) o bases (captanprotones y quedan con carga positiva) dependiendo del medio en el que estén.
El pH al que un aa no se comporta ni como ácido ni como base se denomina punto isoeléctrico pI (en él la estructura delaa no posee carga neta). Los pI varían desde 3 a 10, sin que exista un pH al que todos los aa sean neutros.
· a pH superior 2 o + unidades a pI, el aa aparece cargado negativamente
· a pH inferior...