Determinacion del contenido de proteinas

Determinación de proteínas por el método de
Lowry

Es un método colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. A la muestra se añade un reactivo que forma un complejo coloreado conlas proteínas, siendo la intensidad de color proporcional a la concentración de proteínas, según la ley de lambert-beer.

La determinación cuantitativa de la concentración de proteínas es una de Laspruebas que mas frecuentemente deben hacerse en el laboratorio de Bioquímica. Primitivamente, la cantidad de proteínas se evaluaba midiendo la cantidad total de nitrógeno proteico, y teniendo encuenta que este elemento representa aproximadamente el 16% del peso de una proteína. Este era un método largo y laborioso y con poca sensibilidad. La aparición de métodos calorimétricos ha permitidosolventar estos dos Inconvenientes.

Fundamento
Combina la reacción de biuret con la reducción del reactivo de fenol folin- ciocalteau (ácido fosfomolíbdico- fosfotúngstico) por los residuos deTirosina y triptofano de las proteínas.
El color azuloso desarrollado es leído a 750nm (alta sensibilidad para una concentración protéica baja) o a 500nm (alta sensibilidad para una concentración protéicaalta).

Ventajas:
• Muy sensible
• Menos afectado por la turbidez de la muestra
• Más específico que la mayoría de los otros métodos
• Relativamente simple
• Se puede completar en 1 a 1.5horas
• Capaz de detectar cantidades del orden de 10 microgramos de proteína.

Desventajas:

• El color varía con diferentes proteínas (más que el Método de biuret)

• El color no esestrictamente proporcional a la concentración de proteínas.

• La sacarosa, lípidos, buffers fosfato, monosacáridos y Hexoaminas interfieren con la reacción.

• Las altas concentraciones de azúcaresreductores, Sulfato de amonio y compuestos con sulfhidrilo Interfieren con la reacción.

La reacción que tiene lugar en el metodote lowry es bastante compleja y no del todo conocida. Se desarrolla en las...