Determinacion Del Punto Isoelectrico De La Caseina
Páginas: 6 (1409 palabras)
Publicado: 30 de septiembre de 2012
DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO DE LA CASEÍNA
Jenny Paola Martínez Mondragón 12121059, Laura Marcela Mosquera Salas 12121106
Universidad Icesi
Facultad de Ciencias Naturales
Laboratorio de Bioquímica
Octubre 1 de 2012
pao_5g@hotmail.com, lauram0717@hotmail.com
1. DATOS, CALCULOS Y RESULTADOS
El pH teórico es un valor hallado mediante una concentración conocida del acido y subase conjugada que se va a utilizar, y el pKa que presenta la disolución. Este pH teórico sirve como referencia con respecto al valor de pH que una persona halle en un procedimiento experimental. Esta es la razón por lo cual, en la tabla 1 se muestran los pH teóricos resultantes para diez tubos que contienen acetato 0,1 N, ácido acético al 0,1 N y 0,01 N dando como volumen final 10 mL en cada uno delos tubos.
Tabla 1. Datos de pH teórico de diez tubos de ensayo con un volumen de 10 mL, los cuales contenían acetato y ácido acético a diferentes concentraciones.
Tubo | pH teórico resultante |
1 | 3,2 |
2 | 3,6 |
3 | 3,8 |
4 | 4 |
5 | 4,2 |
6 | 4,5 |
7 | 4,7 |
8 | 5,1 |
9 | 5,5 |
10 | 6,1 |
La carga total de una molécula proteica depende del pH de la solución ydel número relativo de cada aminoácido en la molécula. Así, cuando el pH de la solución es tal que la carga neta de la molécula es cero, es decir, cuando el número total de las cargas negativas iguala al número total de las positivas presentes en la molécula, se llama al valor de pH, punto isoeléctrico o pH isoeléctrico de la proteína1.
Para determinar el punto isoeléctrico de una proteína, seescogió a la caseína, esta es una proteína presente en la leche que tiene la mayoría de los grupos fosfatos unidos mediante los grupos hidroxilo de los aminoácidos serina y treonina2. Para lograr hallar este valor se realizaron tres procedimientos; el primero, aislamiento de la caseína; el segundo, preparación de la proteína y el tercero, el hallazgo del valor del pI de la caseína.
En la tabla2, se registran los datos obtenidos del procedimiento número tres, descrito anteriormente, en donde se mide el pH de la disolución compuesta por ácido acético y acetato a una temperatura única para cada medición del tubo.
Tabla 2. Datos experimentales registrados de pH de diez tubos de ensayo con un volumen de 10 mL, los cuales contenían acetato y ácido acético a diferentes concentraciones.Tubo | pH medido | Temperatura (°C) |
1 | 3,48 | 29,3 |
2 | 3,71 | 29,0 |
3 | 3,93 | 28,9 |
4 | 4,11 | 28,6 |
5 | 4,29 | 28,9 |
6 | 4,46 | 28,6 |
7 | 4,81 | 28,4 |
8 | 5,25 | 29,2 |
9 | 5,8 | 28,2 |
10 | 6,19 | 28,6 |
Seguidamente, se registran los valores de absorbancia de cada uno de los tubos en la tabla 3, de los cuales se hace referencia en la tabla 2. Estos tubosahora no solo presentan la disolución mencionada de acetato y ácido acético sino que también tienen 1 mL de caseína, lo cual permite hallar el punto isoeléctrico mediante ciertos cálculos que serán mostrados mas adelante.
Junto con la tabla 3 se presenta el grafico 1, el cual muestra una grafica de absorbancia medida a una longitud de onda de 640 nm frente al pH medido en la tabla 2.Tabla 3. Datos experimentales registrados de absorbancia a una longitud de onda de 640 nm de diez tubos de ensayo con un volumen de 10 mL, los cuales contenían acetato y ácido acético a diferentes concentraciones y 1 mL de caseína.
Tubo | Absorbancia |
1 | 0,536 |
2 | 0,475 |
3 | 0,482 |
4 | 0,463 |
5 | 0,431 |
6 | 0,415 |
7 | 0,568 |
8 | 0,651 |
9 | 0,661 |
10 | 0,606 |Grafico 1. Grafico de los datos registrados en la tabla 2 del pH medido y absorbancia de diez tubos de ensayo que contienen acetato y ácido acético.
Cálculos de la determinación del pI aproximado de la caseína:
pI= PKa1- PKb22
2. ANALISIS DE RESULTADOS
En la práctica, hallamos el punto isoeléctrico de la caseína, la cual es una proteína conjugada de la leche del tipo fosfoproteína...
Jenny Paola Martínez Mondragón 12121059, Laura Marcela Mosquera Salas 12121106
Universidad Icesi
Facultad de Ciencias Naturales
Laboratorio de Bioquímica
Octubre 1 de 2012
pao_5g@hotmail.com, lauram0717@hotmail.com
1. DATOS, CALCULOS Y RESULTADOS
El pH teórico es un valor hallado mediante una concentración conocida del acido y subase conjugada que se va a utilizar, y el pKa que presenta la disolución. Este pH teórico sirve como referencia con respecto al valor de pH que una persona halle en un procedimiento experimental. Esta es la razón por lo cual, en la tabla 1 se muestran los pH teóricos resultantes para diez tubos que contienen acetato 0,1 N, ácido acético al 0,1 N y 0,01 N dando como volumen final 10 mL en cada uno delos tubos.
Tabla 1. Datos de pH teórico de diez tubos de ensayo con un volumen de 10 mL, los cuales contenían acetato y ácido acético a diferentes concentraciones.
Tubo | pH teórico resultante |
1 | 3,2 |
2 | 3,6 |
3 | 3,8 |
4 | 4 |
5 | 4,2 |
6 | 4,5 |
7 | 4,7 |
8 | 5,1 |
9 | 5,5 |
10 | 6,1 |
La carga total de una molécula proteica depende del pH de la solución ydel número relativo de cada aminoácido en la molécula. Así, cuando el pH de la solución es tal que la carga neta de la molécula es cero, es decir, cuando el número total de las cargas negativas iguala al número total de las positivas presentes en la molécula, se llama al valor de pH, punto isoeléctrico o pH isoeléctrico de la proteína1.
Para determinar el punto isoeléctrico de una proteína, seescogió a la caseína, esta es una proteína presente en la leche que tiene la mayoría de los grupos fosfatos unidos mediante los grupos hidroxilo de los aminoácidos serina y treonina2. Para lograr hallar este valor se realizaron tres procedimientos; el primero, aislamiento de la caseína; el segundo, preparación de la proteína y el tercero, el hallazgo del valor del pI de la caseína.
En la tabla2, se registran los datos obtenidos del procedimiento número tres, descrito anteriormente, en donde se mide el pH de la disolución compuesta por ácido acético y acetato a una temperatura única para cada medición del tubo.
Tabla 2. Datos experimentales registrados de pH de diez tubos de ensayo con un volumen de 10 mL, los cuales contenían acetato y ácido acético a diferentes concentraciones.Tubo | pH medido | Temperatura (°C) |
1 | 3,48 | 29,3 |
2 | 3,71 | 29,0 |
3 | 3,93 | 28,9 |
4 | 4,11 | 28,6 |
5 | 4,29 | 28,9 |
6 | 4,46 | 28,6 |
7 | 4,81 | 28,4 |
8 | 5,25 | 29,2 |
9 | 5,8 | 28,2 |
10 | 6,19 | 28,6 |
Seguidamente, se registran los valores de absorbancia de cada uno de los tubos en la tabla 3, de los cuales se hace referencia en la tabla 2. Estos tubosahora no solo presentan la disolución mencionada de acetato y ácido acético sino que también tienen 1 mL de caseína, lo cual permite hallar el punto isoeléctrico mediante ciertos cálculos que serán mostrados mas adelante.
Junto con la tabla 3 se presenta el grafico 1, el cual muestra una grafica de absorbancia medida a una longitud de onda de 640 nm frente al pH medido en la tabla 2.Tabla 3. Datos experimentales registrados de absorbancia a una longitud de onda de 640 nm de diez tubos de ensayo con un volumen de 10 mL, los cuales contenían acetato y ácido acético a diferentes concentraciones y 1 mL de caseína.
Tubo | Absorbancia |
1 | 0,536 |
2 | 0,475 |
3 | 0,482 |
4 | 0,463 |
5 | 0,431 |
6 | 0,415 |
7 | 0,568 |
8 | 0,651 |
9 | 0,661 |
10 | 0,606 |Grafico 1. Grafico de los datos registrados en la tabla 2 del pH medido y absorbancia de diez tubos de ensayo que contienen acetato y ácido acético.
Cálculos de la determinación del pI aproximado de la caseína:
pI= PKa1- PKb22
2. ANALISIS DE RESULTADOS
En la práctica, hallamos el punto isoeléctrico de la caseína, la cual es una proteína conjugada de la leche del tipo fosfoproteína...
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