Determinacionn De Fosfatasa

DETERMINACION DE FOSFATASA ALCALINA(ALP)INTRODUCCION

La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo. Hidroliza losmonoésteres del ácido ortofosfórico en medio alcalino.En el adulto proviene en parte delhigado (termoestable) y en parte de hueso, sistema reticuloendotelial y vascular (termolabil)dando lugar a distintas izoenzimas.La actividad serica de ALP ósea, encondiciones normales alcanza su mayor actividad en losniños en edad de crecimiento, llegando a triplicar los niveles del adulto, debido a que estaizoenzima se localiza en los osteoblastos. También esfisiológico el aumento que se produce alfinal de primer trimestre de embarazo, a expensad de la izoenzima placentaria que en esteperiodo alcanza niveles máximos.Entre las patologías que afecta laactividad sérica de ALP se pueden citar: carcinomasmetastáticos en higado y hueso, colestasis biliar, infarto al miocardio, pulmonar o renal.
FUNDAMENTO
La ALP hidroliza al p-nitrofenilfosfato, incoloro,produciendo fosftato y p-nitrofenil a pH de 9.8, lavelocidad de aparicion del anion p-nitrofenolto a 405nm, es proporcional a la actividadenzimatica en la muestra.La dietanolamina regula en pH dereaccion y actua como aceptor del fosftato liberado por lafosfatasa.
 ALP + p-NFF 

PO4 + p-Nitrofenol (pH 9.8)
Esta prueba se realiza en el contexto de otras pruebas hepáticas (GOT, GPT, Bilirrubina,GGT)y se utiliza para evaluar problemas hepáticos. Suele asociarse en la elevación de GGT exceptoen problemas óseos donde solo se eleva la ALP.
REACTIVO
Buffer DEA : dietanolaminaSustrato pNFF
MUESTRASuero
MATERIAL
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Espectrofotómetro y cubetas
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Baño maria
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Agua destilada
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Pipetas
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Estandar de calibración
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Reactivos de ALP
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Química Clínica
Manual de Prácticas deLaboratorio
Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez 
PARAMETROS
Longitud de onda405nmTemperatura de reacción25, 30 o 37ºCTiempo3 minutosVol final de reacción2.52mL
PROCEDIMIENTO
Colocar en cubeta a temperatura de...