Determinación Actividad De Fosfatasa Acida De Germen De Trigo

Laboratorio Nº 5: Enzimología II Determinación de las Propiedades Cinéticas de la Enzima Fosfatasa Acida de Germen de Trigo INTRODUCCIÓN Las enzimas son proteínas con un gran poder catalítico y unalto grado de especificidad por su sustrato. Estas proteínas poseen gran importancia en todos los procesos bioquímicos. Actuando en forma concertada, catalizan cientos de reacciones que llevan, entreotros, al metabolismo de nutrientes, la conservación o transformación de energía o la biosíntesis de macromoléculas. La reacción más simple que pueden catalizar las enzimas está representada por laecuación:

Donde E, S y P, representan a la enzima, al sustrato y al producto, respectivamente, mientras que ES y EP representan los complejos transitorios enzima-sustrato y enzima-producto. Paracaracterizar el funcionamiento de una enzima, es importante determinar el como las condiciones ambientales, el pH y la temperatura, afectan su capacidad catalítica. En este trabajo práctico se trabajará conla fosfatasa ácida de germen de trigo, la cual cataliza la hidrólisis de fosfatos monoésteres, con liberación de fosfato inorgánico, según la siguiente reacción:

Dentro de los objetivos a cumplirse encuentra el determinar los parámetros cinéticos de esta enzima. En este ensayo, se usará un sustrato artificial, el p-nitrofenil fosfato (NPP). El grado de hidrólisis de éste se determinaráespectrofotométricamente cuantificando el p-nitrofenol liberado, que en solución alcalina, absorbe fuertemente a 405 nm.

OBJETIVOS Estas actividades prácticas tienen como objetivo que los alumnos 1. 2.Conozcan algunos procedimientos clásicos para determinar actividad enzimática. Verifiquen el efecto de inhibidores sobre los parámetros cinéticos de una enzima.

3. 4.

Apliquen los conceptos desustrato, inhibidores competitivos, inhibidores no competitivo en la interpretación de sus resultados. Observen la variación de la concentración de sustrato en el tiempo, determinen la constante de...